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文檔簡介
1、目的:通過建立一種競爭法定量PCR(Quantitative-Competitive PCR,QC-PCR),定量檢測CVB3感染小鼠血中的CVB3 RNA,研究苦參中抗CVB有效成分對VM產(chǎn)生治療作用的機(jī)制——抗病毒作用以及作用的量效關(guān)系.為抗柯注射液的臨床應(yīng)用提供基礎(chǔ)理論依據(jù).方法:1.競爭法定量PCR的方法學(xué)建立:首先以重疊突變延伸法合成一個內(nèi)含突變點(diǎn)即BamHI酶切位點(diǎn)的內(nèi)參DNA片段,且與待測病毒的目的擴(kuò)增基因序列相似,僅一個
2、堿基的差異;然后,將它與由CVB逆轉(zhuǎn)錄而業(yè)的樣本cDNA共同作PCR擴(kuò)增;擴(kuò)增產(chǎn)物以BamHI酶切分離;最后根據(jù)已知量的內(nèi)參業(yè)計(jì)算待測樣本CVB RNA的量.2.對競爭法定量PCR的評價及證實(shí)抗柯注射液的抗病毒作用:檢測CVB3病毒原液的感染滴度TCID<,50>,然后將其作10倍梯度稀釋,以QC-PCR檢測每一個稀釋度的CVB3 RNA量.結(jié)結(jié)果作相關(guān)回歸分析.結(jié)論:1.競爭法定量PCR與傳統(tǒng)的空斑法和TCID<,50>檢測結(jié)果一致,
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