百合原生質(zhì)體分離及培養(yǎng)的研究.pdf

1、百合(Liliumspp.)是單子葉植物亞綱百合科(Liliaceae)百合屬(Lilium)多年生球根花卉，是國際上十分暢銷的花卉之一。利用組織培養(yǎng)技術(shù)，能夠迅速去除病毒和更新品種，加快了百合的快速繁殖速度，縮短了百合的生育周期。 本試驗以三種百合(東方百合“Bernini”、亞洲百合“Elite”、卷丹)為材料，建立百合直接分化再生系統(tǒng)和愈傷組織再生系統(tǒng)，以此為基礎(chǔ)建立百合原生質(zhì)體分離及純化體系。研究結(jié)果如下： 1.

2、建立了百合直接分化再生系統(tǒng)和愈傷組織再生系統(tǒng)：以鱗莖為外植體，芽分化培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5mg/L+KT0.1mg/L+NAA1.0mg/L，試管苗最適生根培養(yǎng)基為MS+IBA0.5mg/L；以花絲為外植體，最適愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+2,4-D2.0mg/L+水解乳蛋白300mg/L，分化培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5mg/L+KT0.1mg/L+NAA1.0mg/L，最適生根培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基。 2.本試驗選用甘露醇為

3、滲透壓穩(wěn)定劑，采用質(zhì)壁分離方法確定了百合葉片的滲透壓為0.6mol/L。 3.通過試驗得出百合葉片酶解的最佳時間為2h，酶液的最佳配比濃度為Cellulase“Onzuka”RS(纖維素酶)2％+PectinaseY-23(果膠酶)0.1％+MacerozymeR-10(離析酶)0.5％+CaCl2·2H2O10mM+MES5mM+甘露醇0.6mol/L，pH5.6；酶解的條件為：黑暗下25℃，于搖床上振蕩酶解(40rpm)。

4、 4.試驗中酶解前對葉片進行預(yù)處理有效的提高了原生質(zhì)體的產(chǎn)量和活力。通過多種預(yù)處理方法比較得出最佳預(yù)處理方法為13％甘露醇預(yù)處理90min，東方百合“Bernini”原生質(zhì)體產(chǎn)量提高了32.5％，原生質(zhì)體活力提高了8.41％；亞洲百合“Elite”原生質(zhì)體產(chǎn)量提高了18.07％，原生質(zhì)體活力提高了9.52％；卷丹原生質(zhì)體產(chǎn)量提高了20.25％，原生質(zhì)體活力提高了5.95％。誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)對百合葉片原生質(zhì)體產(chǎn)量沒有太大的影

5、響，但對原生質(zhì)體的活力影響較大，東方百合“Bernini”提高了14.18％，亞洲百合“Elite”提高了5.95％，卷丹提高了8.33％。黑暗處理和低溫處理對供試三個品種百合葉片原生質(zhì)體的產(chǎn)量及活力影響不大。 5.通過多種培養(yǎng)方法比較得出最適合百合葉片原生質(zhì)體培養(yǎng)的方法為固液結(jié)合培養(yǎng)，固液結(jié)合培養(yǎng)的一次分裂頻率和細胞團形成頻率均高于薄層漂浮培養(yǎng)，固液結(jié)合培養(yǎng)中，“Bernini”、“Elite”、卷丹形成細胞團的頻率分別為0.