甘蔗原生質(zhì)體分離與培養(yǎng)體系的建立和優(yōu)化.pdf

1、為了獲得高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的甘蔗原生質(zhì)體細(xì)胞，為獲得甘蔗原生質(zhì)體再生植株打下基礎(chǔ)，本研究以新臺(tái)糖22號(hào)ROC22和桂糖28號(hào)GT28幼葉為材料，研究了甘蔗原生質(zhì)體分離的影響因素、原生質(zhì)體培養(yǎng)程序及相關(guān)的技術(shù)環(huán)節(jié)，對(duì)ROC22和GT28甘蔗原生質(zhì)體的分離、純化和培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化，研究結(jié)果表明:
　　1.酶解前質(zhì)壁分離0.5 h與質(zhì)壁分離0h相比:GT28和ROC22原生質(zhì)體的產(chǎn)量和活力分別增加了65.62％、2.08％和105.94％、1.8

2、4％;
　　2.在酶液組合0.5％果膠酶+2％纖維素酶+0.3％半纖維素酶+0.1％離析酶下，ROC22原生質(zhì)體的產(chǎn)量和活力最高，分別為:2.55×107個(gè)·g-1和98.54％; GT28原生質(zhì)體的產(chǎn)量和活力最高，分別為:2.05×107個(gè)·g-1和99.83％;
　　3.不同酶解時(shí)間對(duì)原生質(zhì)體產(chǎn)量影響差異顯著，在酶解10h時(shí)，ROC22和GT28原生質(zhì)體的產(chǎn)量分別比酶解5h時(shí)增加了35.4％和89.81％，酶解10h最適

3、合甘蔗原生質(zhì)體的分離;
　　4.甘蔗原生質(zhì)體純化最適合的離心速率是800 rpm，GT28和ROC22原生質(zhì)體的產(chǎn)量達(dá)到最高，分別為2.1×107個(gè)·g-1和2.02×107個(gè)·g-1，比500 rpm時(shí)相比，分別增加了70.73％和82.23％;當(dāng)離心速率增加到1200 rpm時(shí)，ROC22和GT28原生質(zhì)體的活力分別下降10.13％和11.12％;
　　5.甘蔗原生質(zhì)體培養(yǎng)最適合培養(yǎng)基是KM8P，在KM8P培養(yǎng)基中，RO

4、C22原生質(zhì)體的分裂頻率比MS和N6培養(yǎng)基中分別增加了6.14％和13.17％，而植板率分別增加5.21％和8.91％; GT28的原生質(zhì)體在KM8P培養(yǎng)基中其分裂頻率比在MS和N6培養(yǎng)基中分別增加了9.84％和18.1％，植板率分別增加了8.56％和10.26％。
　　6.最適合兩品種原生質(zhì)體培養(yǎng)的2，4-D濃度是3 mg·L-1，在此濃度下，GT28原生質(zhì)體再生細(xì)胞的分裂頻率和植板率分別高達(dá)19.24％和14.18％，與不加2

5、，4-D時(shí)相比其分裂頻率和植板率分別增加了6.88％和5.74％，ROC22原生質(zhì)體在2，4-D濃度為3mg·L-1時(shí)，原生質(zhì)體的分裂頻率和植板率高達(dá)19.31％和13.95％與不加2，4-D時(shí)相比其分裂頻率和植板率分別增加了8.07％和7.31％;
　　7.微滴培養(yǎng)時(shí)，GT28原生質(zhì)體的分裂頻率和植板率達(dá)到最高，分別比固液培養(yǎng)增加了8.89％和5.36％，分別比液體培養(yǎng)時(shí)增加了13.58％和6.52％; ROC22原生質(zhì)體的分裂

6、頻率和植板率比固液培養(yǎng)時(shí)分別增加了5.27％和7.07％，比液體培養(yǎng)時(shí)分別增加了10.5％和7.81％;
　　8.在激素組合1 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1 KT下，甘蔗原生質(zhì)體的分裂頻率最高，GT28為20.77％，ROC22為18.88％;加入分化培養(yǎng)基培養(yǎng)21 d后，GT28和ROC22原生質(zhì)體再生細(xì)胞的長度，比激素組合1 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1 NAA下分別增加了9.57μm和10.57μ

7、m，與激素組合2 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1NAA相比，則分別增加了11.98μm和17.38μm; GT28和ROC22再生細(xì)胞的寬度分別變?yōu)?2.59μm和14.38μm，此時(shí)細(xì)胞變?yōu)殚L條狀，面積也分別增大到473.59μm2和564.33μm2。
　　綜上，在酶解前質(zhì)壁分離0.5 h，并在0.5％果膠酶+2％纖維素酶+0.3％半纖維素酶+0.1％離析酶組合酶下，酶解10h，通過800 rpm的離心速率下，獲得