中醫(yī)腎生髓理論實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、"腎生髓"理論是中醫(yī)藏象學(xué)說(shuō)的精華觀點(diǎn)之一,中醫(yī)學(xué)的現(xiàn)代化發(fā)展迫切需要對(duì)中醫(yī)理論中的精華觀點(diǎn)進(jìn)行現(xiàn)代科學(xué)詮釋.選擇現(xiàn)代生命科學(xué)所認(rèn)識(shí)到的神經(jīng)系統(tǒng)不同疾病的共同病理生理機(jī)制,從中醫(yī)學(xué)理論補(bǔ)腎健腦的角度對(duì)其指導(dǎo)理論——"腎生髓"理論進(jìn)行重現(xiàn)認(rèn)識(shí),可能是中醫(yī)學(xué)理論現(xiàn)代詮釋較為適合的途徑之一.在這種思路的指導(dǎo)下,我們采用中藥血清藥理學(xué)方法,結(jié)合體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),分別從促進(jìn)PC12細(xì)胞增殖和拮抗谷氨酸興奮性神經(jīng)毒損傷兩個(gè)角度對(duì)經(jīng)典補(bǔ)腎復(fù)方進(jìn)行了體

2、外篩選.同時(shí)設(shè)立兩組養(yǎng)心方作為對(duì)照,以說(shuō)明中醫(yī)理論中腎腦關(guān)系的獨(dú)特性.MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力的結(jié)果顯示補(bǔ)腎復(fù)方BS不僅可以促進(jìn)體外培養(yǎng)的正常PC1 2細(xì)胞增殖,而且還能夠拮抗谷氨酸神經(jīng)毒作用對(duì)PC12細(xì)胞的損傷,說(shuō)明BS具有潛在的神經(jīng)保護(hù)作用.與養(yǎng)心方相比,BS的這種作用在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異.BS含藥血清的最佳作用濃度為20％,這個(gè)結(jié)果與中藥血清藥理學(xué)方法學(xué)的研究報(bào)道一致.在繼續(xù)的研究中,我們對(duì)篩選出的補(bǔ)腎方影響神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)誘

3、導(dǎo)PC12細(xì)胞分化的作用進(jìn)行了研究,結(jié)果顯示2 0%濃度的補(bǔ)腎方含藥血清具有促進(jìn)NGF誘導(dǎo)PC12細(xì)胞分化的作用.其具體機(jī)制尚待進(jìn)一步研究,推測(cè)BS可能通過(guò)改善神經(jīng)細(xì)胞賴以存活的微環(huán)境而起作用.細(xì)胞凋亡被認(rèn)為是最終導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙的主要原因之一.已有的研究結(jié)果顯示不同神經(jīng)系統(tǒng)疾病均存在不同程度的神經(jīng)細(xì)胞凋亡,細(xì)胞凋亡成為神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育和功能障礙的主要病理生理機(jī)制之一.我們以AnnexinV-FITC/PI熒光指示劑對(duì)PC12細(xì)胞進(jìn)行雙

4、染色,采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)前述實(shí)驗(yàn)篩選出的20%濃度BS含藥血清拮抗谷氨酸誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡的作用進(jìn)行了研究.結(jié)果顯示20%濃度BS含藥血清能夠顯著抑制谷氨酸的神經(jīng)毒作用,拮抗其誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞早期凋亡,與NMDA受體拮抗劑MK801的作用相似,推測(cè)BS可能通過(guò)作用于NMDA受體,調(diào)控鈣通道來(lái)抑制細(xì)胞凋亡.具體機(jī)制尚待進(jìn)一步研究.鈣是細(xì)胞內(nèi)重要的第二信使,胞漿游離鈣的變化是聯(lián)系許多生理病理刺激和細(xì)胞內(nèi)效應(yīng)器反應(yīng)之間的樞紐.鈣超載被認(rèn)為

5、是神經(jīng)退行性疾病最后的公共通路.我們對(duì)20%BS含藥血清對(duì)谷氨酸誘導(dǎo)凋亡的PC12細(xì)胞胞漿內(nèi)游離鈣離子濃度的影響進(jìn)行了研究,結(jié)果顯示20%BS含藥血清能夠顯著拮抗谷氨酸誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞胞漿內(nèi)游離鈣離子濃度的過(guò)度升高,推測(cè)拮抗鈣超載可能是補(bǔ)腎方神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制之一,鈣離子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路極有可能是聯(lián)系中醫(yī)理論中腎腦關(guān)系的關(guān)鍵環(huán)節(jié).蛋白磷酸化是機(jī)體調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)生物功能的重要方式之一,也是神經(jīng)系統(tǒng)中細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑的主要分子生物學(xué)現(xiàn)象,被認(rèn)為

6、是細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的最基本最重要的公共通路.假設(shè)上述推論成立,補(bǔ)腎方又是通過(guò)影響哪一條鈣信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的下游通路來(lái)實(shí)現(xiàn)其神經(jīng)保護(hù)作用的呢?我們選擇了神經(jīng)系統(tǒng)中鈣信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)下游通路中的關(guān)鍵信號(hào)蛋白分子鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)作為靶點(diǎn),研究了20%BS含藥血清對(duì)其磷酸化的影響.結(jié)果顯示BS可以抑制在谷氨酸影響下的CaMK Ⅱ過(guò)度磷酸化.同時(shí),BS能夠降低在谷氨酸影響下CaMKⅡ蛋白總含量的增高,推測(cè)這可能與BS影響表達(dá)CaMK Ⅱ