“咸入腎”理論與從腎論治鹽敏感性高血壓的實驗研究.pdf

1、目的:
　　1.建立高鹽高脂飲食誘導的鹽敏感性高血壓大鼠模型，并觀察模型大鼠是否存在腎素-血管緊張素系統(tǒng)激活，以及是否伴有胰島素抵抗等狀態(tài);
　　2.研究補腎中藥對鹽敏感性高血壓模型大鼠血壓以及腎素-血管緊張素系統(tǒng)和腎功能等指標的影響，了解其是否能降低模型大鼠血壓、抑制腎素-血管緊張素系統(tǒng)激活以及對腎功能是否有改善作用;
　　3.研究補腎中藥對鹽敏感性高血壓模型大鼠伴有的胰島素抵抗、促炎、促凝狀態(tài)等的影響，觀察中藥對這

2、些病理狀態(tài)是否有改善作用;
　　4.通過研究補腎中藥對腎素-血管緊張素系統(tǒng)與胰島素抵抗等環(huán)節(jié)的影響，探討中藥可能的作用機制，為鹽敏感性高血壓的治療探索可行途徑，闡明“咸入腎”理論的科學內(nèi)涵。
　　方法:
　　1.高鹽高脂飲食誘導的鹽敏感性高血壓大鼠模型的建立。
　　清潔級SD大鼠30只，雄性，6周齡。適應性飼養(yǎng)10天，隨機分為4組:正常飼料組（CON）5只，高鹽組(HS)5只，高脂組(HF)5只，高鹽高脂組(HS

3、F)15只。各組大鼠自由飲水，分別對應給予普通飼料、高鹽飼料、高脂飼料和高鹽高脂飼料。每周用尾套法測血壓，2周后，隔夜空腹12小時，用毛細管眼眶后靜脈叢采血，測血糖、胰島素、血脂、腎素活性、血管緊張素Ⅱ、血管緊張素Ⅰ轉化酶，計算HOMA-IR、ISI;代謝籠收集24小時尿液，測尿鈉、尿鉀、尿醛固酮、尿微量白蛋白，計算大鼠24h尿微量白蛋白排泄率。
　　2.研究補腎中藥對鹽敏感性高血壓模型大鼠血壓、腎素-血管緊張素系統(tǒng)和腎功能等的干

4、預作用。
　　動物分組:在飲食干預2周后，將高鹽高脂組(HSF)大鼠隨機分為3組，每組5只大鼠:HSF組（不予藥物干預）、纈沙坦組(VAL)和六味地黃組(LW)，連同原來的正常飼料組，共為4組。纈沙坦劑量為13.33mg/kg/d（體重），六味地黃組劑量為8.13g/kg/d（體重）。纈沙坦、六味地黃方每天灌胃1次，持續(xù)6周。實驗過程中，正常飼料組大鼠予普通飼料，其余各組大鼠均繼續(xù)給予高鹽高脂飼料。每周測體重、用尾套法測量血壓。藥

5、物干預后的第6周，隔夜空腹12小時后采血，測血液中腎素活性、血管緊張素Ⅱ、血管緊張素Ⅰ轉化酶;代謝籠收集24小時尿液，測尿量、尿鈉、尿鉀、尿醛固酮、尿微量白蛋白，計算大鼠24小時尿鈉、尿鉀排泄量以及24小時尿微量白蛋白排泄率等。取腎臟組織-80℃凍存，RT-PCR檢測Renin、AngⅡ、AT1R，并做石蠟包埋切片，HE染色，進行組織病理學形態(tài)觀察。
　　3.研究補腎中藥對鹽敏感性高血壓模型大鼠伴有的胰島素抵抗及促炎、促凝狀態(tài)等的

6、作用。
　　動物分組和造模方法同前。飲食干預8周（藥物治療6周）后，隔夜空腹12小時后采血，生化法檢測血液中血糖、血脂四項(TC、TG、HDL-c、LDL-c)等;ELISA法檢測血液中胰島素、瘦素(LEP)、脂聯(lián)素(ADP)、組織纖溶酶原激活物(t-PA)、纖溶酶原激活物抑制劑1(PAI-1)、C反應蛋白(CRP)、腫瘤壞子因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、游離脂肪酸(FFA)等，計算HOMA-IR和ISI。

7、>　　結果:
　　1.高鹽高脂飲食誘導的鹽敏感性高血壓大鼠模型的建立。
　　與正常飼料組大鼠相比，各組大鼠在高鹽或/和高脂飲食干預2周后，血壓顯著升高，其中高鹽高脂組血壓升高最多（119.4±4.7 vs.94.0±2.2 mmHg，p＜0.05）;經(jīng)過飲食干預2周后，高鹽高脂組血AngⅡ顯著降低(66.39±3.62 vs.82.16±14.68ng/L，p＜0.05)，其它循環(huán)RAS組分(PRA、ACE)變化不大。在尿電

8、解質方面，高鹽高脂組24小時尿鈉排泄量顯著升高(1.92±0.48 vs.0.75±0.18 mmol/L，p＜0.05)，24小時尿鉀排泄量顯著升高（1.49±0.23 vs.0.98±0.28 mmol/L，p＜0.05），尿鉀/尿鈉比值較正常飼料組顯著降低（0.80±0.16 vs.1.35±0.49，p＜0.05）。高鹽高脂組尿微量白蛋白排泄率顯著升高（22.16±4.01 vs.6.66±1.17 ug/L，p＜0.05）。在

9、胰島素敏感性方面，與正常飼料組大鼠相比，各組大鼠在高鹽或/和高脂飲食干預2周后，空腹血糖顯著升高，其中高鹽高脂組升高最明顯（3.66±0.39 vs.2.60±0.52 mmol/L，p＜0.05）;空腹血胰島素水平與血糖水平的變化趨勢基本相同，同樣是高鹽高脂組升高最明顯（3.83±0.29 vs.2.99±0.23 mIU/L，p＜0.05）;高鹽高脂組HOMA-IR顯著升高(p=0.000)，ISI顯著降低(p=0.001)。上述血

10、壓、循環(huán)RAS活性、腎臟功能和胰島素敏感性等方面指標的結果表明:高鹽高脂飲食誘導鹽敏感性高血壓大鼠模型成功，可用于本課題的實驗研究。
　　2.研究中藥對鹽敏感性高血壓模型大鼠血壓以及腎素-血管緊張素系統(tǒng)和腎功能相關指標的影響。
　　經(jīng)過1周治療后，與高鹽高脂組相比，纈沙坦組(VAL)血壓就有顯著降低（89.2±4.8 vs.117.6±9.3 mmHg，p＜0.05），在治療第2周，六味地黃組(LW)顯示出降壓效果（105.

11、2±8.8 vs.118.6±5.3 mmHg，p＜0.05）;治療6周后，LW顯著降低血壓至正常水平（103.0±8.1 vs.118.4±6.3mmHg，p＜0.05）。
　　在循環(huán)RAS方面，飲食干預2周，與正常飼料組大鼠相比，高鹽高脂組AngⅡ顯著降低（66.39±3.62 vs.82.16±14.68 ng/L，p＜0.05），至飲食干預第8周，高鹽高脂組AngⅡ較正常飼料組有所下降，但無統(tǒng)計學意義;經(jīng)過6周藥物治療，L

12、W及VAL均能顯著升高AngⅡ濃度。而其它RAS組分如血管緊張素轉換酶(ACE)、腎素活性(PRA)各組間無顯著差異。飲食干預2周，與正常飼料組大鼠相比，高鹽高脂組尿醛固酮(UALD)顯著上升(135.02±9.93 vs.101.27±13.30 ng/L，p＜0.05)，經(jīng)過6周藥物治療，LW與VAL均可顯著降低UALD至正常水平。
　　在腎臟局部RAS方面，經(jīng)過8周的高鹽高脂飲食干預，與正常飼料組大鼠相比，高鹽高脂組大鼠腎臟

13、局部AngⅡ、腎素、血管緊張素Ⅱ受體Ⅰ型(AT1R)mRNA的表達水平都顯著升高。經(jīng)過6周的藥物治療，與高鹽高脂組相比，LW能顯著抑制腎臟RAS的激活狀態(tài)，與VAL效果相當。
　　在腎功能方面，經(jīng)過8周的高鹽高脂飲食干預，與正常飼料組大鼠相比，高鹽高脂組大鼠24小時尿鈉排泄量(p=0.007)、尿鉀排泄量顯著增多(p=0.017)，而尿鉀/尿鈉比值偏低，提示在高鈉攝入的情況下，高鹽高脂組大鼠仍存在鈉潴留現(xiàn)象;經(jīng)過6周的藥物治療，與

14、高鹽高脂組大鼠相比，LW能促進尿鈉的排出及減少尿鉀流失，療效與VAL相當。尿微量白蛋白(MAU)檢測結果表明，經(jīng)過8周的高鹽高脂飲食干預，與正常飼料組大鼠相比，高鹽高脂組大鼠MAU顯著升高(p=0.001);經(jīng)過6周的藥物治療，與高鹽高脂組相比，LW能顯著降低MAU水平(p=0.010)，與VAL療效相當(p=0.008)。腎臟組織HE染色結果表明，高鹽高脂組大鼠可見腎小球入球動脈輕度玻璃樣變性，其余各組腎小球入球動脈、小動脈和腎單元未

15、見顯著改變。血肌酐、尿素氮各組間無顯著差異，說明我們采用的造模方法是造成以血壓升高為主伴有輕度腎臟損害的動物模型，與臨床上大部分SSHT患者的病變程度相似。
　　3.研究補腎中藥對鹽敏感性高血壓模型大鼠伴有的胰島素抵抗及其相關機制的作用。
　　在糖脂代謝方面，至飲食干預第8周時，高鹽高脂組大鼠血糖和血胰島素水平進一步升高，與正常飼料組大鼠相比差異顯著(分別為5.55±0.62 mmol/L vs.2.87±0.77 mmol

16、/L，p＜0.05和4.92±1.34 mIU/L vs.2.79±0.26 mIU/L，p＜0.05)，血脂方面，TC、TG與LDL-c各組之間無顯著差異;而經(jīng)過6周的藥物治療，與高鹽高脂組大鼠相比，VAL組的血糖(p=0.000)及血胰島素(p=0.005)濃度下降至正常，LW的血糖水平顯著下降(p=0.000); ISI及HOMA-IR結果表明，LW與VAL均能改善胰島素敏感性及降低IR程度(p＜0.05)。
　　在相關脂肪

17、細胞因子方面，治療6周后，高鹽高脂組與正常飼料組大鼠相比，瘦素(p=0.047)、PAI-1顯著升高(p=0.031)，t-PA顯著降低(p=0.037);CRP、TNF-α、IL-6、ADP、FFA各組之間無顯著差異。經(jīng)過6周的藥物治療，與高鹽高脂組相比，LW方能顯著降低瘦素、PAI-1至正常水平，并升高tPA至正常水平，與VAL療效相當。
　　結論:
　　1.高鹽高脂飲食干預可誘導出穩(wěn)定可靠的鹽敏感性高血壓大鼠模型，該方

18、法簡便易行，較好的模擬了現(xiàn)代飲食習慣，適用于改善鹽敏感性高血壓藥物篩選及機制的研究。
　　2.六味地黃方顯著降低鹽敏感性高血壓模型大鼠血壓，療效與纈沙坦相當;對循環(huán)RAS的抑制有良性調節(jié)作用，抑制腎局部RAS激活;對該模型大鼠的鈉潴留及尿鉀流失現(xiàn)象也有改善作用，并減少尿微量白蛋白排泄率。
　　3.六味地黃方顯著降低鹽敏感性高血壓模型大鼠血糖、血胰島素水平，提高胰島素敏感性，降低HOMA-IR;對脂肪細胞因子及纖溶功能紊亂有顯