TLN及ILK在強(qiáng)直性脊柱炎患者PBMCs中表達(dá)及意義的初步研究.pdf

1、目的
　　 強(qiáng)直性脊柱炎(Ankylosing spondylitis，AS)是常見(jiàn)的炎癥性系統(tǒng)性風(fēng)濕病，其發(fā)病率及致殘率均較高，但病因及發(fā)病機(jī)制至今尚未完全明確。整合素是一類普遍存在于細(xì)胞中的跨膜糖蛋白，參與細(xì)胞間及細(xì)胞與胞外基質(zhì)(Extracellularmatrix，ECM)間的黏附及細(xì)胞信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)，介導(dǎo)了包括炎癥性疾病在內(nèi)的多種疾病的發(fā)生與發(fā)展。踝蛋白(Talin，TLN)及整合素連接激酶(Integrin-linked

2、kinase，ILK)是整合素信號(hào)通路中兩個(gè)重要的調(diào)節(jié)蛋白，它們?cè)谡纤匦盘?hào)通路的活化過(guò)程中發(fā)揮了至關(guān)重要的調(diào)節(jié)作用。目前已有個(gè)別研究初步提示整合素信號(hào)通路可能涉及AS的發(fā)病及炎癥調(diào)節(jié)，但尚未見(jiàn)有關(guān)TLN及ILK與AS關(guān)系研究發(fā)表。本研究擬通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)(Flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測(cè)AS患者單核及T淋巴細(xì)胞中TLN及ILK的表達(dá)情況，并以逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(Reversetranscription-polymerase

3、chain reaction，RT-PCR)方法檢測(cè)AS患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)中TLN及ILK mRNA的表達(dá)情況，同時(shí)以健康對(duì)照者(Healthy control，HC)及類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoidarthritis，RA)患者為對(duì)照，初步探討TLN及ILK在AS發(fā)病及炎癥活動(dòng)中的可能作用及其臨床意義，為AS的發(fā)病機(jī)制及治療研究提供理論依據(jù)。

4、r>　　 方法
　　 1.分別入組年齡及性別相互匹配的活動(dòng)期AS患者、HC及活動(dòng)期RA患者各30例，詳細(xì)記錄其一般資料及相關(guān)臨床資料。每例個(gè)體均以EDTA抗凝管于空腹?fàn)顟B(tài)抽取外周靜脈血共6ml以行FCM及RT-PCR檢測(cè)；對(duì)于AS及RA患者，尚同時(shí)抽血行血沉及CRP檢查。
　　 2.依次以不同免疫熒光標(biāo)記的抗CD14、CD3、TLN及ILK特異性單克隆抗體對(duì)外周血標(biāo)本進(jìn)行染色，并以流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，分別比較3組樣本間

5、CD14+單核細(xì)胞及CD3+T淋巴細(xì)胞中TLN及ILK平均熒光強(qiáng)度(Mean fluorescenceintensity，MFI)的差異；并將AS患者單核及T淋巴細(xì)胞中TLN及ILK的表達(dá)水平與常用的AS疾病活動(dòng)性及功能性指標(biāo)進(jìn)行相關(guān)分析。
　　 3.分離PBMCs并提取其總RNA，以RT-PCR方法分別測(cè)定各組個(gè)體PBMCs中TLN及ILK mRNA的表達(dá)并比較其組間差異。
　　 4.組間均數(shù)差異顯著性檢驗(yàn)采用單因素方

6、差分析(One-way ANOVA)及Student-Newman-Keuls(SNK)檢驗(yàn)。變量間的相關(guān)性評(píng)價(jià)采用Pearson線性相關(guān)分析。所有統(tǒng)計(jì)分析均采用SPSS13.0軟件進(jìn)行。
　　 結(jié)果
　　 1.FCM檢測(cè)結(jié)果：AS組CD14+單核細(xì)胞中TLN及ILK MFI分別為37.71±11.65和53.59±18.64，均高于HC組(28.33±10.1，41.78±13.25)及RA組(26.25±9.87，4

7、0.32±18.84)(P＜0.05)，而HC組及RA組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；AS組CD3+T淋巴細(xì)胞中TLN及ILK MFI分別為16.57±4.37和19.04±5.99，也均高于HC組(9.75±3.21，15.59±6.2)及RA組(9.37±3.29，14.89±5.41)(P＜0.05)，而HC組及RA組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 2.相關(guān)分析結(jié)果提示，AS患者CD14+單核細(xì)胞TLN

8、MFI與CRP、BASDAI、BASFI及ASDAS-B均存在正相關(guān)；ILK MFI與ESR、BASDAI、ASDAS-A、ASDAS-C及ASDAS-D也存在正相關(guān)(P＜0.05)。而AS患者CD3+T細(xì)胞與各臨床疾病活動(dòng)性及功能性指標(biāo)均不存在相關(guān)(P＞0.05)。
　　 3.RT-PCR檢測(cè)結(jié)果：AS、HC及RA組PBMCs中TLN mRNA的相對(duì)定量值分別為1.37±0.22、0.26±0.05及0.27±0.06，ILK

9、 mRNA的相對(duì)定量值則分別為1.82±0.30、0.23±0.04及0.26±0.04，AS組PBMCs中TLN及ILKmRNA的表達(dá)水平均高于HC及RA組(P＜0.05)，而HC與RA組間差異則無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論
　　 1.AS患者單核與T淋巴細(xì)胞中TLN及ILK的表達(dá)水平均高于HC及RA患者，且其PBMCs中TLN及ILK mRNA的表達(dá)水平也高于HC及RA患者，提示TLN及ILK可能參與了