CX3C趨化因子Fractalkine在野百合堿致肺動脈高壓中的作用及葛根素的干預效應(yīng).pdf

1、目的：觀察CX3C趨化因子Fractalkine在野百合堿誘導的肺動脈高壓大鼠模型中的變化并探討其在肺動脈高壓發(fā)生發(fā)展中的作用及葛根素的干預效應(yīng). 方法：將SPF級雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠50只(體重270～310g),隨機分為正常組(N組),溶劑對照組(C組),野百合堿兩周組(M2組),野百合堿三周組(M3組),葛根素干預組(P組),每組10只.溶劑對照組采用無水酒精與生理鹽水2:8比例混合單次腹腔注射,野

2、百合堿兩周、三周組采用上述溶劑配成的1.0﹪野百合堿溶液以50mg/kg體重的劑量單次腹腔注射后分別飼養(yǎng)兩周、三周.葛根素干預組在注射野百合堿溶液后每晨以40mg/kg體重劑量腹腔注射飼養(yǎng)三周.飼養(yǎng)條件各組相同.動物飼養(yǎng)到規(guī)定時間后,麻醉動物,右心導管法測量肺動脈平均壓(mPAP),右心室平均壓(mRVP),頸總動脈插管測頸動脈平均壓(mCAP),分別稱量右心室游離壁(RV)和左心室加室間隔(LV+S)重量.以mPAP,mCAP和RV/

3、(LV+S)﹪作為判斷模型建立成功的指標,以RV/(LV+S)﹪反映右心肥大指標.光鏡和電鏡下分別觀察肺細小動脈顯微、超微結(jié)構(gòu)變化,利用Image-Pro Plus6.0軟件測定肺細小動脈管壁面積/管總面積(WA/TA)、肺細小動脈中膜厚度(PAMT)反映肺血管重建情況,酶聯(lián)免疫吸附試驗測定血漿Fraetalkine(sFKN)濃度,免疫組化法測定肺組織和肺細小動脈FKN和NF-KB的表達,用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)測定肺組織中FKN mRN

4、A的表達變化. 結(jié)果：(1)N組與C組肺動脈平均壓(mPAP)、右心室平均壓(mRVP)、右心室重量比RV/(LV+S)﹪均無顯著性差異.N組mPAP=12.93±1.93mmHg、mRVP=11.66±1.81、RV/(LV+S)﹪=(22.55±2.59)﹪;.M2組mPAP=20.58±3.54mmHg、mRVP=18.14±2.47mmHg、RV/(LV+S)﹪=(29.83±4.07)﹪;M3組mPAP=-26,04±

5、5.03mmHg、mRVP=22.17±5.63mmHg、RV/(LV+S)﹪=(59.52±12.86)﹪;模型組(M2、M3組)上述三項指標均顯著高于N組,(M2組與N組RV/(LV+S)﹪比較p<0.05,其余指標組間比較p<0.01),且M3組mPAP、RV/(LV+S)﹪顯著高于M2組(p<0.01).P組mPAP=22.34±3.76mmHg較M3組降低(p/0.05)、RV/(LV+S)﹪=(40.32±5.24)﹪較M3

6、組顯著降低(p<0.01).反映體循環(huán)的頸動脈平均壓(mCAP)在各組之間無統(tǒng)計學差異.上述結(jié)果提示注射野百合堿的大鼠肺動脈壓力增高,右心室肥大,證實肺動脈高壓模型制造成功.(2)光鏡下:N組、C組肺細小動脈內(nèi)皮細胞扁平連續(xù),內(nèi)彈力板自然彎曲,管壁均勻一致,血管周圍無明顯炎癥細胞浸潤.M2組細小肺動脈內(nèi)皮細胞腫脹,內(nèi)彈力板扭曲變形,中膜增厚,管壁厚薄不均,管腔偏心狀狹窄,血管周圍以淋巴細胞為主的炎癥細胞浸潤,M3組肺細小動脈內(nèi)皮細胞部分

7、脫落,內(nèi)彈力板進一步扭曲甚至斷裂,管壁明顯增厚,部分小動脈閉塞,血管周圍炎癥細胞浸潤明顯,部分成團.模型組(M2、M3組)肺細小動脈管壁面積/管總面積(WA/TA)和肺細小動脈中膜厚度(PAMT)均較N組顯著增高(p<0.01).M3組WA/TA大于M2組(p<0.05),:PAMT'較M2組顯著增加(p<0.01).P組肺細小動脈內(nèi)彈力板扭曲減少,管壁增厚減輕,血管周圍炎癥細胞浸潤減少,WA/TA較M3組減小(p<0.05),PAMT

8、較:M3組顯著減少(p<0.01). 模型組大鼠肺細小動脈超微結(jié)構(gòu)觀察:M2組大鼠肺細小動脈內(nèi)皮細胞向管腔內(nèi)突起,形成立方上皮,線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯腫脹.M3組大鼠肺細小動脈內(nèi)皮細胞嚴重拱橋樣突起,基底部與基底膜分離,內(nèi)彈力板嚴重扭曲,平滑肌細胞間膠原纖維增生.(3)各組大鼠血漿可溶性Fraetalkine(sFKN)濃度比較:N組與C組之間無差異.模型組(M2、M3組)與正常組相比均有顯著性升高(p<0.01),M3組較M2組亦

9、有顯著性升高(p<0.01).P組較M3組明顯降低(p<0.01).血漿sFKN濃度與肺動脈血管中膜厚度呈正相關(guān)(r=0.66,p<0,01,n=8),與右心室重量比呈正相關(guān)(r=0.58,p<0.01,n=8).(4)各組大鼠肺組織FKN mRNA相對含量之間的比較:N組與C組之間無顯著性差異.模型組(M2、:M3組)均顯著高于N組(P<0.01),M3組較M2組升高(p<0.05),P組較M3組顯著下降(p<0.01).(5)各組大

10、鼠肺動脈管壁FKN蛋白及NF-κB p65蛋白表達的比較:FKN在模型組(M2、M3組)較正常組均明顯升高(p<0.01),M2組與:M3組之間無顯著性差異,P組較:M3組下降(P<0.05).FKN蛋白與動脈管壁厚度呈正相關(guān)(r=0.64,p<0.01,n=8),與mPAP呈正相關(guān)(r=0.56,p<0.01,n=8).NF-κB p65在:M2組與正常組比較雖無統(tǒng)計學差異但有增高趨勢,M3組則顯著高于正常組(P<0.05),P組較M

11、3組顯著下降(P<0.01).FKN的表達與'NF-κB p65蛋白表達呈高度正相關(guān)(r=0.73,p<0.01,n=8). 結(jié)論：1、CX3C趨化因子Fractakine(FKN)及其介導的炎癥反應(yīng)在野百合堿誘導的肺動脈高壓形成和發(fā)展及肺動脈重建過程中可能起重要作用.2、FKN在肺動脈高壓形成過程中的表達增加可能與NF-κ B途徑有關(guān).3、葛根素具有抑制野百合堿誘導的肺動脈高壓和肺血管結(jié)構(gòu)重建的作用,使FKN表達下調(diào)可能是其重