MACC1在胰腺癌中的表達(dá)及其對增殖、遷移及耐藥等功能影響的實驗研究.pdf

1、1.研究背景及目的：
　　 胰腺癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，起病隱匿、早期診斷非常困難、發(fā)展十分迅速、預(yù)后較差，死亡率較高。胰腺癌是在遺傳因素和環(huán)境因素的共同作用下，經(jīng)過多階段復(fù)雜的生物學(xué)演變而形成的惡性疾病。大部分患者在其就診時已經(jīng)屬于晚期，手術(shù)切除率只有10％-20％，5年生存率不足5％。胰腺癌病人的預(yù)后與是否能夠早期診斷及治療方案選擇是否合理密切相關(guān)。因此，尋找能夠早期診斷胰腺癌的特異性分子指標(biāo)，對胰腺癌的早期診斷和指導(dǎo)

2、治療具有重要意義。MACC1是一種在結(jié)腸癌中新發(fā)現(xiàn)的致癌基因，且與腫瘤轉(zhuǎn)移和病人預(yù)后高度相關(guān)。而MACC1在胰腺癌中的研究尚未見報道，故本課題對MACC1在胰腺癌中的表達(dá)情況及其在胰腺癌腫瘤增殖、遷移和耐藥中的作用進(jìn)行了研究。
　　 2.研究方法：
　　 2.1、經(jīng)我院倫理委員會及病人同意，我們收集了自2010年1月到2011年12月60例胰腺癌病人血清及49例正常人血清。采用ELISA法測定這109例血清標(biāo)本中MACC

3、1的蛋白表達(dá)量，并結(jié)合臨床資料進(jìn)行統(tǒng)計分析。
　　 2.2、在基因水平和蛋白水平上檢測5株胰腺癌細(xì)胞系中MACC1的表達(dá)量，并驗證3種MACC1siRNA的干擾效果，確定效果最好的一對siRNA用于后續(xù)實驗。
　　 2.3、采用MTT試驗檢測干擾胰腺癌CFPAC-1細(xì)胞系中MACC1的表達(dá)對胰腺癌細(xì)胞增殖的影響。
　　 2.4、進(jìn)行transwell遷移實驗，觀察MACC1對胰腺癌細(xì)胞系CFPAC-1遷移的影響，

4、并檢測EMT相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。
　　 2.5、采用MTT試驗和流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)，檢測干擾MACC1后胰腺癌細(xì)胞系CFPAC-1對吉西他濱化療耐藥的影響，并檢測凋亡相關(guān)蛋白的變化，并探討MACC1在胰腺癌遷移及化療耐藥過程中發(fā)揮生物學(xué)作用的機(jī)制。
　　 3.結(jié)果：
　　 3.1、通過ELISA法檢測，我們首次發(fā)現(xiàn)MACC1在腫瘤病人血清中也存在高表達(dá)情況。60例胰腺癌病人血清中，有38例呈陽性表達(dá)；而在49例正常人

5、血清中，只有2例存在陽性表達(dá)情況。在胰腺癌病人中，我們發(fā)現(xiàn)，MACC1高表達(dá)與胰腺癌病人淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期相關(guān)。
　　 3.2、MACC1在胰腺癌細(xì)胞系CFPAC-1中表達(dá)最高，BXPC-3細(xì)胞系表達(dá)較弱，AsPC-1、PANC-1和MIAPaCa-2等細(xì)胞系中，MACC1幾乎檢測不到表達(dá)。在3對siRNA引物中，第2對引物干擾效果最好。
　　 3.3、MTT試驗結(jié)果顯示，干擾掉MACC1后，對胰腺癌細(xì)胞系

6、CFPAC-1的增殖具有顯著的抑制作用。
　　 3.4、遷移試驗表明，干擾掉MACC1后，明顯降低了CFPAC-1細(xì)胞的遷移能力，且Westemblot方法發(fā)現(xiàn)這也引起了EMT相關(guān)蛋白E-cadherin的上調(diào)。
　　 3.5、流式檢測和MTT試驗同時顯示，干擾掉MACC1后，導(dǎo)致CFPAC-1細(xì)胞對吉西他濱更為敏感，相關(guān)抗凋亡蛋白Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9減少，且通路蛋白Ras和p-ERK1/2