PGC-1α在多發(fā)性骨髓瘤中的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、本文分三個部分進(jìn)行探討：
　　第一部分：PGC-1α在多發(fā)性骨髓瘤中的表達(dá)及其對細(xì)胞增殖能力的影響
　　目的：檢測過氧化物酶體增殖物受體共激活因子-1α（peroxisome proliferator activate d receptorγ coactivator-1α，PGC-1α）在多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）中的表達(dá)，并研究PGC-1α對MM細(xì)胞增殖能力的影響。
　　方法：收集RPMI

2、8226、U266細(xì)胞、正常人外周血B淋巴細(xì)胞和MM患者臨床標(biāo)本，RT-PCR法檢測MM細(xì)胞和臨床標(biāo)本中PGC-1α和ERR-α的表達(dá)情況；PGC-1α小干擾RNA（Small interfering RNA,siRNA）處理RPMI8226細(xì)胞，Western blotting檢測PGC-1α蛋白表達(dá)情況，CCK-8檢測細(xì)胞增殖活力變化。
　　結(jié)果：RPMI8226細(xì)胞中PGC-1α和ERR-αmRNA的表達(dá)量顯著高于正常對照，

3、U266細(xì)胞中PGC-1αmRNA的表達(dá)量低于正常對照；約55.6％MM患者臨床標(biāo)本中PGC-1αmRNA表達(dá)量增高；Western blotting檢測細(xì)胞中PGC-1α表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)siPGC-1α處理后的細(xì)胞中PGC-1α表達(dá)量降低；CCK-8法檢測細(xì)胞增殖情況時觀察到，siPGC-1α處理后的RPMI8226細(xì)胞增殖受到抑制。
　　結(jié)論：PGC-1α在MM細(xì)胞及臨床標(biāo)本中高表達(dá)，這種高表達(dá)可能具有促進(jìn)MM細(xì)胞增殖的作用。<

4、br>　　第二部分：PGC-1α促進(jìn)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞增殖的機(jī)制研究
　　目的：通過體外干擾PGC-1α的表達(dá)，研究PGC-1α促進(jìn)MM細(xì)胞增殖的相關(guān)機(jī)制。
　　方法：siRNA干擾RPMI8226細(xì)胞中PGC-1α表達(dá)，RT-PCR法檢測PGC-1α、ERR-α、VEGF和GLUT-4的表達(dá)；Western blotting檢測PGC-1α、ERR-α及GLUT-4的蛋白表達(dá)；Transwell小室試驗觀察干擾MM細(xì)胞中PG

5、C-1α的表達(dá)后，對血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移能力的影響；CCK-8檢測RPMI8226細(xì)胞增殖活力。
　　結(jié)果：siPGC-1α處理RPMI8226細(xì)胞后，細(xì)胞中PGC-1α、VEGF和GLUT-4 mRNA水平降低，western blotting結(jié)果顯示PGC-1α、ERR-α及GLUT-4蛋白水平顯著降低（p<0.05）；內(nèi)皮細(xì)胞遷移試驗結(jié)果表明抑制RPMI8226細(xì)胞中PGC-1α的表達(dá)后，對內(nèi)皮細(xì)胞的募集能力受到抑制；siERR

6、-α處理細(xì)胞后，RPMI8226細(xì)胞在24h和48h時的增殖受到不同程度的影響。
　　結(jié)論：PGC-1α通過誘導(dǎo)VEGF和GLUT-4的表達(dá)從而影響MM細(xì)胞增殖能力，從而有可能參與MM的代謝及血管新生過程。
　　第三部分：調(diào)控PGC-1α改變多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性
　　目的：通過siRNA調(diào)控PGC-1α的表達(dá)，研究PGC-1α是否影響MM細(xì)胞對化療藥物的敏感性。
　　方法：硼替佐米處理MM RPMI

7、8226細(xì)胞后，RT-PCR檢測細(xì)胞中PGC-1α、SOD-2、GPX-1表達(dá)；Western blotting法檢測RPMI8226細(xì)胞中PGC-1α的表達(dá)；siRNA干擾PGC-1α后采用流式細(xì)胞儀檢測硼替佐米對MM細(xì)胞中活性氧類物質(zhì)（ROS）及凋亡水平的影響；MTT法和CCK-8法檢測細(xì)胞增殖活力。
　　結(jié)果：MTT及CCK-8結(jié)果表明siRNA干擾PGC-1α后，硼替佐米對RPMI8226細(xì)胞的增殖抑制能力顯著增強(qiáng)；RT-

8、PCR及Western blotting結(jié)果表明RPMI8226細(xì)胞接受硼替佐米處理后，PGC-1α的表達(dá)量顯著增高，SOD-2、GPX-1的表達(dá)在硼替佐米處理后同樣增高；使用siRNA干擾PGC-1α表達(dá)后，RPMI8226細(xì)胞中PGC-1α、SOD-2、GPX-1的表達(dá)量降低，流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示siRNA干擾組中ROS水平明顯高于對照組，凋亡水平亦明顯高于對照組。
　　結(jié)論：PGC-1α能通過誘導(dǎo)SOD-2、GPX-1的表達(dá)，