轉(zhuǎn)錄后基因沉默在煙草對PVY和CMV雙價(jià)抗性中的應(yīng)用研究.pdf

1、煙草病毒病害是煙草上的主要病害,PVY和CMV均在我國煙草上廣泛分布,且多復(fù)合發(fā)生.對于病毒病的防治,抗病毒育種成為最經(jīng)濟(jì)有效的防治手段.但是在傳統(tǒng)育種中存在抗病性與不良農(nóng)藝性狀連鎖等問題,轉(zhuǎn)基岡生物技術(shù)為解決這一問題提供了一條可行性的路線.基因沉默現(xiàn)象是上世紀(jì)末被發(fā)現(xiàn)的,目前對其作用機(jī)制已有了比較詳細(xì)的認(rèn)識,在植物抗病毒中的應(yīng)用研究也已開展很多,已有的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明,利用基因沉默技術(shù)可以獲得高抗乃至免疫水平的抗性,其在抗病育種中具有非常

2、廣闊的用前景. 本論文是利用轉(zhuǎn)錄后基因沉默技術(shù)進(jìn)行的雙價(jià)病毒抗性轉(zhuǎn)基因煙草研究.在國內(nèi)首次利用病毒抑制子PVY HP-Pro和CMV 2b的保守區(qū)段為靶標(biāo)進(jìn)行雙價(jià)病毒抗性的研究.根據(jù)GenBank中的數(shù)據(jù)確定靶標(biāo)序列后,利用RT-PCR技術(shù)克隆了國內(nèi)流行株系的PVY H4C-Pro片段和CMV 2b片段.將兩靶標(biāo)序列串聯(lián)后以此為基礎(chǔ)進(jìn)行載體構(gòu)建,通過反向中間載體和正反向中間載體得到靶標(biāo)串聯(lián)片段的反向重復(fù)序列結(jié)構(gòu),用其替換掉雙元表