人支氣管干細胞的定位及性狀解析.pdf

1、目的：干細胞是指具有自我更新能力及多向分化潛能的細胞.雖然胚胎干細胞、神經(jīng)干細胞、造血干細胞、骨髓間充質(zhì)干細胞、皮膚干細胞、胃腸干細胞等相繼發(fā)現(xiàn),并且造血干細胞已部分應(yīng)用于臨床.但呼吸道中的干細胞尚為推測中的功能細胞,其定位尚未解決.進行支氣管干細胞的定位研究,對闡明支氣管損傷修復(fù)的機理、肺癌的組織發(fā)生等有重要的理論意義,而且有自體支氣管重建的實用價值,將來甚至可能形成生物醫(yī)學(xué)產(chǎn)業(yè).該研究應(yīng)用光鏡、電鏡、AB-PAS染色、免疫組織化學(xué)等

2、方法,于原位觀察人支氣管上皮經(jīng)5-FU損傷后的修復(fù)過程,從中發(fā)現(xiàn)支氣管干細胞.因干細胞具有不被Rhodamine123染色的特性,并且此特性與細胞表面ATP依賴性外排泵--P-糖蛋白有關(guān),因此本研究還應(yīng)用流式細胞儀、免疫熒光法、蛋白印跡法、RT-PCR等方法檢測損傷修復(fù)過程中Rhodamine123的動態(tài)變化及P-糖蛋白的表達情況,進一步進行支氣管干細胞的性狀解析.結(jié)論1.本研究首次應(yīng)用5-FU作為損傷因素,建立了離體人支氣管損傷模型,

3、發(fā)現(xiàn)了處于G0期的支氣管干細胞,這些干細胞能增殖分化,修復(fù)人支氣管上皮.2.人支氣管干細胞特點是:對5-FU有抗性的,PCNA染色陰性、處于細胞周期的G0期,形態(tài)上是未分化的細胞.3.5-FU的損傷使人支氣管干細胞活化,Rhodamine123染色陰性、P-糖蛋白陽性表達的支氣管干細胞占殘留活細胞的比例增多.提示:從5-FU損傷后殘留的細胞中篩選支氣管干細胞可能更為有效.4.β1-整合素及CK-19在已分化細胞中呈陽性反應(yīng).二者均不能作