大鼠體內(nèi)氣管損傷修復(fù)過(guò)程中氣管干細(xì)胞定位及Shh動(dòng)態(tài)變化的研究.pdf

1、 研究通過(guò)應(yīng)用氟尿嘧啶(5-FU)建立大鼠體內(nèi)氣管損傷修復(fù)模型，使用流式細(xì)胞儀分離出的側(cè)群(SP)細(xì)胞。采用光鏡、免疫組化、熒光染色等方法，觀察氣管上皮修復(fù)過(guò)程并對(duì)干細(xì)胞加以定位研究；采用免疫熒光及RT-PCR方法對(duì)氣管干細(xì)胞中ABCG2在蛋白及mRNA水平的表達(dá)加以研究。并通過(guò)半定量RT-PCR法動(dòng)態(tài)觀察了氣管干細(xì)胞增殖分化過(guò)程中Shh信號(hào)傳導(dǎo)通路的變化。 研究表明：1.發(fā)現(xiàn)5-FU作用后氣管上皮剩余的G0期細(xì)胞中存

2、在著干細(xì)胞，正是由于這些干細(xì)胞的增殖分化，氣管上皮才得以修復(fù)。2.大鼠氣管干細(xì)胞性狀分析：是對(duì)5-FU有抗性的、PCNA染色陰性、處于G0期、形態(tài)上未分化的細(xì)胞。3.5-FU作用后，免疫熒光檢測(cè)顯示ABCG2陽(yáng)性細(xì)胞增多，RT-PCR可見(jiàn)ABCG2/Bcrp1表達(dá)，由于以往研究表明ABCG2/Bcrp1可作為確定SP干細(xì)胞的表型標(biāo)記，故進(jìn)一步證實(shí)5-FU作用后殘留的G0期細(xì)胞中含有干細(xì)胞。4.正常組織、5-FU作用30min時(shí)及損傷修復(fù)