p160 Rock-1缺失小鼠UUO模型腎小管間質(zhì)纖維化機制的實驗研究.pdf

1、背景：腎小管間質(zhì)纖維化(Renaltubulointerstitialfibrosis)是多種慢性腎臟疾病如慢性腎炎、慢性腎盂腎炎、狼瘡性腎炎、糖尿病腎病發(fā)展到終末期腎衰竭的共同途徑。它以過量細胞外基質(zhì)(如：膠原Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型、纖維連接蛋白和層粘連蛋白)在間質(zhì)區(qū)積聚以及成纖維細胞增生為特征。TGF-β1被認為是致纖維化信號傳導通路中的重要因子，在腎間質(zhì)纖維化發(fā)生發(fā)展的多個環(huán)節(jié)中起作用。TGF-β1引起腎臟小管間質(zhì)纖維化的下游信號主要有

2、p38MAPK、Smads和RhoA/Rock三條通路。p38MAPK與細胞凋亡有關；Smads蛋白是一組信號傳遞蛋白，其中Smad2/3、Smad7在纖維化的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用；RhoA/Rock信號通路以影響細胞張力纖維形成和肌球蛋白輕鏈磷酸化等多種不同機制參與腎小管間質(zhì)纖維化的發(fā)生發(fā)展。Rock-1和Rock-2是Rho下游的兩種激酶，它們可以調(diào)節(jié)肌動蛋白的構(gòu)成，影響細胞的運動和細胞漿移動。TGF-β1除了導致纖維化的發(fā)生發(fā)

3、展外，還有抗炎、抗腫瘤、組織修復等多種功能，抑制或敲除該基因可以在一定程度上阻止或減輕腎小管間質(zhì)纖維化的進程，但同時也會影響其正常的生理功能。因此，通過尋找TGF-β1的致纖維化下游信號通路分子，不僅可以阻斷TGF-β1的致纖維化作用，而且又不會影響其正面效應，將為腎臟纖維化的防治提供新的治療靶。 目的：研究在Rock-1基因敲除(Rock-1Knockout，Rock-1KO)小鼠的單側(cè)輸尿管結(jié)扎(UnilateralUret

4、eralObstruction，UUO)腎間質(zhì)纖維化模型中，腎小管間質(zhì)纖維化指標的變化，及其纖維化信號通路中重要信號分子如TGF-β1、Smad2/3和Rock2等的變化，探討腎小管間質(zhì)纖維化的發(fā)生機制。 方法：實驗用UUO腎間質(zhì)纖維化模型作為研究模型。實驗選用Rock-1KO健康雌雄配對小鼠26只，Rock-1WT(wildtype，即基因表型正常)小鼠22只，根據(jù)實驗研究時間分為5天組和10天組。各組中分別包括：Rock-1

5、KO-UUO組，Rock-1KO正常組(非手術組)，Rock-1WT-UUO組，Rock-1WT正常組(非手術組)。分別于術后5天、10天處死各組動物。運用免疫組化、Western-blot、RealtimePCR等實驗技術觀察兩組動物的Rock-2、TGF-β1、p-Smad2/3(磷酸化Smad2/3)以及膠原Ⅰ、Ⅲ、纖維連接蛋白(Fibronectin，F(xiàn)N)和α-平滑肌肌動蛋白(α-SmoothMuscleActin，α-SMA

6、)的表達水平變化。 結(jié)果：與Rock-1WT-UUO小鼠相比，TGF-β1在Rock-1KO-UUO小鼠模型的第5天顯著增加(P＜0.05)，第10天無明顯變化(P＞0.05)；p-smad2/3在第5和10天均顯著增加(P＜O.05)。而兩者在Rock-1KO正常組小鼠的表達無明顯改變(P＞0.05)。膠原蛋白Ⅰ、Ⅲ、FN和α-SMAmRNA表達在第5天和第10天的Rock-1KO小鼠與WT小鼠UUO模型中均無顯著性差異(P＞