84K楊再生和遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究.pdf

1、84K楊是韓國(guó)培育成功的銀白楊和腺毛楊(Populus alba×Populus glandulosa)雜種無性系，因其生長(zhǎng)快、繁殖迅速等特點(diǎn)逐漸成為楊樹基因工程的重要受體樹種。本文以84K楊為實(shí)驗(yàn)材料，研究并建立了兩種不同的高效再生及遺傳轉(zhuǎn)化體系，結(jié)果如下:
　　(1)在前人的研究基礎(chǔ)上，選擇6-BA、NAA、TDZ三種激素對(duì)84K楊直接分化出芽再生體系進(jìn)行實(shí)驗(yàn)優(yōu)化，得到的高效再生培養(yǎng)基為:MS培養(yǎng)基+0.002 mg·L-1

2、TDZ+0.5 mg·L-16-BA+0.1 mg·L-1 NAA，分化率達(dá)到100％，平均每個(gè)葉片可分化出20～30個(gè)不定芽;
　　(2)利用培養(yǎng)條件將脫分化與再分化過程分開，通過不同激素及培養(yǎng)基對(duì)84K楊進(jìn)行再生實(shí)驗(yàn)，得到一個(gè)高效的經(jīng)愈傷組織途徑的再生體系。84K楊葉片在黑暗條件下誘導(dǎo)愈傷組織的高效培養(yǎng)基為MS+0.5 mg·L-1 KT+0.2 mg·L-12,4-D;莖段為WPM+0.5mg·L-1 KT+0.1 mg·L

3、-12，4-D;愈傷組織誘導(dǎo)出芽的高效培養(yǎng)基為WPM+0.05 mg·L-1TDZ+0.5 mg·L-16-BA。葉片或莖段愈傷組織誘導(dǎo)率可達(dá)到100％，愈傷組織分化出芽率最高達(dá)到98％，平均每個(gè)愈傷組織可出芽約30個(gè);
　　(3)84K楊外植體在Kan濃度為20 mg·L-1的直接誘導(dǎo)出芽培養(yǎng)基和誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基上時(shí)誘導(dǎo)出芽和誘導(dǎo)愈傷的能力被完全抑制;愈傷組織在Kan濃度為20 mg·L-1的愈傷組織誘導(dǎo)出芽培養(yǎng)基上時(shí)分化出芽能力

4、被抑制;濃度為250 mg·L-1的Cef可有效抑制農(nóng)桿菌生長(zhǎng)，且對(duì)外植體誘導(dǎo)出芽和愈傷組織以及愈傷組織誘導(dǎo)出芽不產(chǎn)生影響;
　　(4)利用L9(34)正交試驗(yàn)分析了84K楊外植體直接分化出芽遺傳轉(zhuǎn)化體系的預(yù)培養(yǎng)時(shí)間、菌液濃度、侵染時(shí)間和共培養(yǎng)時(shí)間4個(gè)因素的作用效果。結(jié)果表明，侵染前外植體不能進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)，經(jīng)預(yù)培養(yǎng)的外植體與不經(jīng)預(yù)培養(yǎng)的外植體的分化能力有很大差異。用于侵染的菌液濃度為OD6000.4～0.6，侵染時(shí)間10～15分鐘，