葡聚糖包被的納米液態(tài)氟碳脂質乳劑：一種潛在的多功能靶向造影劑.pdf

1、第一章DTPA-甘露糖．葡聚糖體外靶向試驗 目的：通過一種鈣離子依賴的受體結合反應，證實一種靶向分子載體N一雙羥乙基氨基酸與二乙三胺五乙酸．甘露糖．葡聚糖(DTPA．Mannosyl-Dextran)的甘露糖受體靶向性能。我們的最終目標是開發(fā)一種能夠攜帶靶向物質的大分子載體。 方法：DTPA-Mannosyl．dextran(MW=35,800g／mol，每摩爾葡聚糖分子含56摩爾甘露糖分子)用異硫氰酸熒光黃染料(FIT

2、C)標記后用于實驗。巨噬細胞株J-774按105個／孔種植于24孔板內的圓形蓋玻片上培養(yǎng)，24小時后用3．O％多聚甲醛(paraformaldehyde，w／v用PBS緩沖液配制)固定。然后用藍色DNA熒光染料(Hoechst)標記巨噬細胞核，在用PBS緩沖液清洗后在37~C與FITC-DTPA-Mannose-dextran分別在結合液(含鈣離子)、非結合液(不含鈣離子)中孵育20分鐘。然后清洗、固定后用共聚焦顯微鏡觀測。 結

3、果：空白對照組只見巨噬細胞核Hoechst發(fā)出藍色熒光，未見細胞邊緣(表面)發(fā)出任何FITC綠色標記熒光；結合液組可見細胞邊緣FITC綠色熒光，與細胞核的藍色熒光之間的黑色區(qū)域為細胞漿；非結合液組細胞邊緣無或極淡綠色熒光。各試驗組所測細胞邊緣熒光強度值減去背景熒光強度值為實際值。1：2稀釋、1：10稀釋、1：50倍稀釋mannosyl-dextran加結合液組細胞邊緣熒光強度實際值分別為：707．94~94．88、441．59~101．

4、62、378．92~104．63；1：2稀釋、1：10稀釋、l：50倍稀釋mannosyl-dextran加非結合液組細胞邊緣熒光強度值分別為：144．98±153．58、125．39±44．67、105．81±43．15。獨立樣本student-t檢驗結果顯示1：2稀釋、1：10稀釋、1：50倍稀釋mannosyl-dextran加結合液組細胞邊緣熒光強度值與l：2稀釋、1：10稀釋、1：50倍稀釋mannosyl-dextran加非

5、結合液組細胞邊緣熒光強度值之間均有顯著性差異(p

6、射劑量放射強度百分比(％ID)，然后根據(jù)PET檢測結果得出各臟器動態(tài)％ID并作圖。非核素標記的DTPA-mannosyl-dextran包被的納米氟碳乳劑和DTPA-dextran包被的納米氟碳乳劑被用于微螺旋CT實驗。在注射前與注射后4小時分別用微螺旋CT掃描。所獲斷層CT圖像被用于測量肝、脾的CT值。 結果：葡聚糖包被的納米氟碳乳劑的直徑介于70nnl與90Bin之間。每摩爾納米微粒大約與140摩爾葡聚糖分子相連。動態(tài)放射強

7、度百分比(％ID)圖顯示在DTPA-mannosyl-dextran包被的納米液態(tài)氟碳乳劑組內肝臟的％ID逐漸增加而血中的％ID逐漸下降，而在對照組內卻無此現(xiàn)象。在注射后第20分鐘，肝、脾內放射強度與對照組放射強度比較有顯著差別(P<0．01)。微螺旋CT結果顯示注射后4小時，DTPA-mannosyl-dextran包被的納米氟碳乳劑相對于不含甘露糖的DTPA-dextran包被的納米氟碳乳劑聚集到肝臟的數(shù)量明顯多于對照組。

8、結論：活體動物實驗證明了DTPA-mannosyl-dextran包被的納米液態(tài)氟碳乳劑對甘露糖受體的靶向性能。 第三章生物素化的納米液態(tài)氟碳脂質乳劑體外聚集初步實驗研究 目的：制備一種可以靶向聚集的納米液態(tài)氟碳脂質乳劑，以證明聚集后的納米液態(tài)氟碳乳劑能夠增強超聲顯像的性能。 方法：用旋轉蒸發(fā)技術與高壓均質技術制備生物素化的納米液態(tài)氟碳脂質乳劑(60％w／v)。將該氟碳乳劑1Oml進行1：5倍稀釋，然后取10只玻

9、璃試管，每管加入氟碳乳劑稀釋液1ml。分別向每只試管內加入如下劑量的親和素溶液0．01mg，O．02mg，O．04mg，O．08mg，O．16mg，0．32mg，0．64mg，1．28mg，138mg，1．48mg，1．58mg，1．68mg。靜置約5分鐘后，肉眼觀測溶液外觀變化，然后分別取20~tl試管底部溶液用數(shù)碼顯微鏡觀察。將100ml生物素化的液態(tài)氟碳乳劑100倍稀釋后滴加親和素進行超聲顯像觀察。 結果：肉眼觀察：空白對

10、照組即未加親和素組：溶液呈均勻不透明乳液狀；加入0．0lmg親和素組：溶液外觀無明顯肉眼變化，但試管底部似乎有極少許沉淀；加入O．02mg親和素組：溶液可見分為兩層，上層依然呈乳劑狀，但下層為白色沉淀物；加入O．04mg親和素組：溶液下層沉淀物增多，上層乳劑顏色變淺；加入O．08mg，O．16mg，0．32mg，0．64mg親和素組：溶液上層顏色逐漸變淺，下層沉淀物逐漸增多；加入1．28mg親和素組：溶液上層已變透明，下層見多量沉淀物；

11、加入1．38mg，1．48mg，1．58mg，1．68mg組：下層沉淀物不再增加，上層溶液清澈透明，但溶液上方的管壁可見明顯的沉淀物附著。顯微鏡觀察：空白對照組即未加親和素組：整個顯微視野為均勻分散的乳劑，未見凝集現(xiàn)象。加入O．Olmg，O．02mg，O．04mg，O．08mg，O．16mg，0．32mg，0．64mg，1．28mg，l38mg，1．48mg，1．58mg，1．68mg組，從底部所取溶液無含大量氟碳乳劑聚集沉淀物。超聲顯