E2F8在肝癌細(xì)胞分化中作用的研究及利用RNA干擾技術(shù)篩選潛在的肝癌驅(qū)動(dòng)性突變基因.pdf

1、本文對(duì)E2F8在肝癌細(xì)胞分化中的作用及利用RNA干擾技術(shù)篩選潛在的肝癌驅(qū)動(dòng)性突變基因進(jìn)行了研究。本研究包括兩個(gè)方面：
　　 第一部分：探討E2F家族中的一個(gè)非典型成員之一E2F8在肝癌細(xì)胞周期以及分化中的作用。本實(shí)驗(yàn)室之已有研究發(fā)現(xiàn)E2F8基因在肝癌病人樣本中表達(dá)上調(diào)，E2F8基因通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期素cyclinD1的表達(dá)影響細(xì)胞周期，從而調(diào)控肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。本研究中，我們進(jìn)一步探討了E2F8對(duì)肝癌細(xì)胞分化的影響。在肝癌細(xì)胞中RN

2、A干擾E2F8表達(dá)后，通過(guò)定量PCR以及蛋白免疫印記技術(shù)檢測(cè)我們發(fā)現(xiàn)Nanog、Sox2、Oct-4、DLK1等胚胎干細(xì)胞/干祖細(xì)胞的早期分子標(biāo)志物表達(dá)上調(diào)，而成熟肝臟細(xì)胞分子標(biāo)志物ALB則明顯的表達(dá)下調(diào)；此外，在部分肝癌細(xì)胞株中將E2F8以及E2F8-DBD過(guò)表達(dá)后可以觀察到Nanog的表達(dá)下調(diào)；在成球的肝癌細(xì)胞中中以及普通的肝癌細(xì)胞中用腺病毒干擾E2F8后進(jìn)行成球克隆形成試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)成球的個(gè)數(shù)增多以及球克隆變大。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)RNA干擾

3、E2F8表達(dá)后Ezh2和Suz12的表達(dá)水平上調(diào)，通過(guò)CHIP實(shí)驗(yàn)我們證明了E2F8可以與Ezh2的啟動(dòng)子相結(jié)合從而發(fā)揮調(diào)控作用。我們的最新研究結(jié)果表明E2F8通過(guò)調(diào)控Ezh2和Suz12的表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞的細(xì)胞周期以及分化進(jìn)程起著重要的作用。
　　 第二部分：利用RNA干擾技術(shù)篩選細(xì)胞生長(zhǎng)相關(guān)的肝癌突變基因從而鑒定肝癌癌變驅(qū)動(dòng)性突變基因。肝細(xì)胞性肝癌是一種很常見(jiàn)的癌癥，它通常具有浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的遺傳易感性。在這里，我們?cè)趯?duì)十例伴有門