小鼠黑色素移植瘤模型中血管生成擬態(tài)形成的時(shí)空變化及其分子機(jī)制的初步觀察.pdf

1、目的:利用小鼠移植瘤模型動態(tài)觀察血管生成擬態(tài)的時(shí)空變化以及CD31、MMP2、MMP9、CathepsinD、HMB45在惡性黑色素移植瘤血管生成擬態(tài)形成中的作用.方法:1.建模 采用B16黑色素瘤細(xì)胞懸液皮下注射法制作小鼠惡性黑色素移植瘤動物模型,同時(shí)對動物編號.成瘤后根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表每天隨機(jī)抽取一只小鼠處死,共12天,獲得腫瘤樣本114例.2.染色 腫瘤標(biāo)本常規(guī)固定、包埋,HE染色、CD31、CathepsinD、MMP2、MMP9、

2、HMB45免疫組織化學(xué)染色和CD31與PAS雙重染色.3.計(jì)數(shù)方法 顯微鏡下分別計(jì)數(shù)腫瘤組織中央?yún)^(qū)和外周區(qū)的高倍視野(×400)下血管生成擬態(tài)以及內(nèi)皮依賴性血管,連續(xù)計(jì)數(shù)10個(gè)高倍視野,取其均值分別定義為血管生成擬態(tài)密度和內(nèi)皮依賴性血管密度;血管生成擬態(tài)周圍及遠(yuǎn)離血管生成擬態(tài)區(qū)域腫瘤細(xì)胞中陽性細(xì)胞百分率;內(nèi)皮依賴性血管周圍及遠(yuǎn)離內(nèi)皮依賴性血管區(qū)域腫瘤細(xì)胞中陽性百分率;連續(xù)計(jì)數(shù)10個(gè)高倍視野并取其均值.4.圖象及數(shù)據(jù)處理 利用計(jì)算機(jī)圖象處

3、理軟件計(jì)算每張切片中的壞死面積比;利用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,以p<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.結(jié)論:血管生成擬態(tài)是腫瘤細(xì)胞為適應(yīng)環(huán)境而產(chǎn)生的一種獨(dú)特的血液供應(yīng)方式,與內(nèi)皮依賴性血管并存于腫瘤組織內(nèi).惡性黑色素瘤移植瘤中存在血管生成擬態(tài),隨腫瘤生長變化而與內(nèi)皮依賴性血管之間存在一定的時(shí)空變化規(guī)律.惡性黑色素瘤早期的血液供應(yīng)中血管生成擬態(tài)和內(nèi)皮依賴性血管共同起作用,在內(nèi)皮依賴性血管未長入腫瘤組織時(shí),腫瘤中央?yún)^(qū)的血管生成擬態(tài)

4、替代內(nèi)皮依賴性血管發(fā)揮臨時(shí)性血管作用,腫瘤中央?yún)^(qū)的血管生成擬態(tài)密度高于腫瘤外周區(qū),隨著腫瘤的發(fā)展內(nèi)皮依賴性血管長入腫瘤中央?yún)^(qū)形成完善的血管網(wǎng)并成為主要的腫瘤血液供應(yīng)方式,血管生成擬態(tài)逐漸被內(nèi)皮依賴性血管所替代.惡性黑色素瘤形成血管生成擬態(tài)的過程需要包括組織蛋白酶、基質(zhì)金屬蛋白酶在內(nèi)的多種蛋白酶類的參與,為其形成提供足夠的空間、為細(xì)胞在基質(zhì)中的遷移清掃障礙,血管生成擬態(tài)中的基質(zhì)重塑也需要上述酶類的積極參與.同時(shí)血管生成擬態(tài)周圍腫瘤細(xì)胞表面