金納米棒聯(lián)合碘-125粒子照射治療肝癌的體外細胞實驗研究.pdf

1、目的：制備出葉酸偶聯(lián)的的二氧化硅包覆的金納米棒，觀察其靶向進入細胞過程，并檢測葉酸偶聯(lián)的金納米棒放射增敏的效果，為臨床治療肝癌提供一種新思路。
　　方法：體外培養(yǎng)肝癌HepG2細胞。利用種子生長法制備具有一定長軸比的金納米棒(GNRs)，以二氧化硅作為殼材，制備出二氧化硅包覆的金納米棒(GNRs@SiO2)，并用硅烷偶聯(lián)劑和二氧化硅偶聯(lián)，將葉酸聯(lián)接到二氧化硅包覆的金納米棒，制得葉酸偶聯(lián)的金納米棒納米探針(GNRs@SiO2-FA)

2、。用羅丹明異硫氰酸酯與GNRs@SiO2-FA表面的氨基基團反應(yīng)，得到羅丹明標(biāo)記的GNRs@SiO2-FA。利用透射電鏡、紫外對制備出的葉酸偶聯(lián)的金納米棒納米探針進行表征。采用MTT法研究其生物相容性;利用ICP-MS法測GNRs@SiO2-FA細胞攝入的靶向性;用透射電鏡及激光共聚焦顯微鏡觀察金納米顆粒進入細胞過程。GNRs@SiO2-FA對肝HepG2細胞放射增敏測定:將細胞分為四組:A陰性對照組;B單純照射組;C GNRs@SiO

3、2+照射組;D GNRs@SiO2-FA+照射組，B、C、D組經(jīng)125I粒子照射照射后采用原位末端標(biāo)記法(Tunel)判斷腫瘤細胞原位凋亡的情況，并用流式細胞儀檢測細胞周期分析。
　　結(jié)果：制備出的金納米棒在512nm和716 nm處有兩個特征吸收峰，二氧化硅包覆的金納米棒呈橢球形核-殼結(jié)構(gòu)，其兩個特征吸收峰位置位于514nm和716nm處。葉酸偶聯(lián)的二氧化硅包覆的金納米棒，在282 nm處出現(xiàn)了一個新的吸收峰，這與葉酸的吸收峰位

4、置一致，證實成功制備GNRs@SiO2-FA。MTT法檢測結(jié)果說明葉酸偶聯(lián)金納米棒對肝癌HepG2細胞生物安全性較好。ICP-MS法測GNRs@SiO2-FA細胞攝入的靶向性結(jié)果，說明我們制備的納米表面的葉酸具有很強的靶向性;透射電鏡觀察到，GNRs@SiO2-FA與細胞共同孵育1h后，已有GNRs@SiO2-FA與細胞膜接觸，細胞伸出偽足，4-24h內(nèi)在肝癌HepG2細胞質(zhì)內(nèi)可見大量包裹著GNRs@SiO2-FA的吞噬泡，但細胞核內(nèi)未

5、見到GNRs@SiO2-FA。激光共聚焦顯微鏡見GNRs@SiO2-FA能攜帶熒光探針進入HepG2細胞內(nèi)。GNRs@SiO2-FA對肝癌HepG2細胞放射增敏測定采用原位末端標(biāo)記法(Tunel)利用凋亡細胞數(shù)量來判斷腫瘤細胞原位凋亡的情況，B、C、D組肝癌HepG2細胞經(jīng)相同放射活度125I粒子照射后，D組細胞凋亡率顯著高于B、C組（P值＜0.05），C組細胞凋亡率顯著高于B組(P值＜0.05)。流式細胞儀進行細胞周期分析，125I粒

6、子照射后細胞周期發(fā)生再分布，接受相同放射活度照射的各實驗組G2期及S期細胞所占比例增高，進行兩兩組間比較，每兩組間的差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P值＜0.05），接受相同放射活度照射的各實驗組之間以及未接受照射的對照組間在相同的照射時間段(24h)的細胞周期分布均具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)論：制備出葉酸偶聯(lián)金納米棒納米探針，具有很好的生物相容性，能攜帶熒光探針進入細胞內(nèi)。金納米顆粒能以細胞吞噬的方式大量進入肝癌HepG2細胞內(nèi)，進入細胞內(nèi)