葉酸偶聯(lián)金納米棒在VX-2肝癌模型組織分布情況及其聯(lián)合125I粒子誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　本文通過(guò)建立一種以葉酸偶聯(lián)二氧化硅包覆的金納米棒探針，并建立VX-2兔肝癌模型，觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)葉酸偶聯(lián)二氧化硅包覆的金納米棒（GNRs@SiO2-FA）的攝取狀況，檢測(cè)GNRs@SiO2-FA對(duì)肝癌細(xì)胞的靶向性。探討葉酸偶聯(lián)金納米棒聯(lián)合125I粒子內(nèi)放療對(duì)兔VX2肝癌凋亡及其相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。
　　方法：
　　以二氧化硅(SIO2)為外殼，利用種子生長(zhǎng)法制備橢圓形二氧化硅包覆的金納米棒(GNRs@SIO2

2、)，并將其氨基化與葉酸偶聯(lián)，制得葉酸偶聯(lián)二氧化硅包覆的金納米棒（GNRs@SiO2-FA）。利用透視電鏡和紫外光譜觀察（GNRs@SiO2-FA）光學(xué)特性，利用MTT法檢測(cè)其細(xì)胞毒性。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中采用CT引導(dǎo)下穿刺接種法建立兔VX-2肝癌模型27只，行CT、超聲檢查觀察腫瘤生長(zhǎng)情況。2周后將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分成三組，即空白對(duì)照組（注入生理鹽水），門靜脈注射組，瘤內(nèi)直接注射組，在成功注射GNRs@SiO2-FA后24h、48h和72h每組3只兔

3、肝癌模型分別被處死，并將模型的腫瘤組織和其他主要臟器取出，冰凍切片，采用雙光子熒光共聚焦顯微鏡觀察GNRs@SiO-FA在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)分布情況。相同操作方法建立兔VX-2肝癌模型24只。2周后將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分成空心125I粒子對(duì)照組，金納米棒治療組,單純125I粒子植入組，聯(lián)合治療組。應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況，Western Blot法檢測(cè)bcl-2、bax、caspase-3蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　MTT檢測(cè)

4、結(jié)果顯示GNRs@SiO2-FA具有高度生物相容性，激光共聚焦顯微鏡觀察表明GNRs@SiO2-FA對(duì)腫瘤細(xì)胞具有高度靶向性，在24h內(nèi)即可特異性地與腫瘤細(xì)胞結(jié)合，并聚集在腫瘤細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。在VX-2兔肝癌模型的腫瘤細(xì)胞凋亡率檢測(cè)中，單純金納米棒組和單純125I粒子照射的肝癌細(xì)胞凋亡率均組較空白對(duì)照組均有升高（P<0.05），聯(lián)合組較單純金納米棒組和單純125I粒子照射組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。Western Blot示

5、聯(lián)合治療組較其他三組凋亡相關(guān)蛋白bax、caspase-3明顯上調(diào)，bcl-2明顯下調(diào)（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　GNRs@SiO-FA可以在VX-2兔肝癌模型體內(nèi)可以快速識(shí)別肝癌細(xì)胞并特異性與腫瘤細(xì)胞結(jié)合，GNRs@SiO2-FA聯(lián)合125I粒子治療肝癌，通過(guò)內(nèi)放療與熱療的協(xié)同作用，促進(jìn)bax、caspase-3蛋白的表達(dá)并抑制bcl-2蛋白的表達(dá)，從而誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞的凋亡達(dá)到治療肝癌的目的。GNRs@SiO2-FA