廣西巴馬小型豬促生長激素釋放激素成熟肽基因克隆及其真核表達質(zhì)粒對小鼠生長效應(yīng)的研究.pdf

1、促生長激素釋放激素(Growth Hormone Releasing Hormone，GHRH)是一種蛋白類激素，由下丘腦合成并分泌。它能特異的誘導(dǎo)垂體生長激素(Growth Hromone，GH)的合成與分泌，對脊椎動物的生長、發(fā)育及代謝調(diào)控起著極其重要的作用。 本研究以廣西巴馬小型豬基因組DNA為模板，用特異性引物擴增GHRH外顯子3，以外顯子3為模板，用引物延伸懸掛PCR法擴增GHRH成熟肽序列，純化后，連接到PMD18-

2、T載體，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌，篩選陽性克隆，測序，同源性比較。結(jié)果表明：克隆的廣西巴馬小型豬GHRH成熟肽序列全長為132bp，其中外顯子3基因序列長105bp。廣西巴馬小型豬GHRH外顯子3基因序列與GenBank(NCBI)中報到的豬的GHRH外顯子3相比：同源性為97.14％；在第84位、98位、100位發(fā)現(xiàn)三處堿基突變，均為轉(zhuǎn)換，點突變均為無義突變。說明廣西巴馬小型豬的矮小體型與GHRH成熟肽分子結(jié)構(gòu)之間沒有直接的關(guān)系。 為探

3、討注射GHRH真核表達質(zhì)粒對動物生產(chǎn)性能的影響，本研究選擇平均體重為14.05±5.48g的小鼠42只，按性別相同，體重相近，兩兩配對，分為空質(zhì)粒組和PEGFP-GHRH組。試驗開始，在空質(zhì)粒組小鼠右腿脛骨部肌肉按0.5μg質(zhì)粒/g體重注射．PEGFP-N1質(zhì)粒，同時PEGFP-GHRH組小鼠在相同部位按0.5μg質(zhì)粒/g注射PEGFP-GHRH質(zhì)粒。35天試驗結(jié)果表明：外源的GHRH在肌肉中獲得了表達。GHRH基因至少可以在小鼠體內(nèi)滯