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文檔簡介
1、目的：用RNA干擾技術選擇性下調大鼠心肌細胞中轉錄因子Pax-8(paired boxgene8)的表達,觀察其對心肌細胞凋亡和增殖的影響。并運用基因技術尋找Pax-8基因的下游基因。
方法：大鼠胚胎心肌細胞株(H9C2(2-1))轉染針對Pax-8基因的小干擾RNA(smallinterfering RNA,siRNA)后,檢測其對細胞凋亡的影響。并分別提取Pax-8基因敲除小鼠純合子(Pax-8 KO-/-)和雜合子(
2、Pax-8 KO+/-)的心臟總RNA,利用基因芯片、半定量RT-PCR和熒光實時定量PCR檢測兩組小鼠基因表達水平,篩選出轉錄因子Pax-8的下游基因。
結果：針對Pax-8基因的小干擾RNA片段能有效下調H9C2大鼠胚胎心肌細胞Pax-8 mRNA(50.38％,P<0.05)和蛋白(54.17％,P<0.05)表達,轉染后的細胞凋亡和增殖抑制率明顯增加?；蛐酒瑱z測發(fā)現(xiàn),Pax-8 KO-/-組與Pax-8 KO+/
3、-相比有42個差異表達的基因。半定量RT-PCR驗證Bcl2-like14(Bcl2114)基因在Pax-8 KO-/-組上調。定量RT-PCR證實Pax-8 KO-/-組@Bcl2114基因的表達水平較Pax-8 KO+/-組及Pax-8+/+(野生型)組分別上調2.07倍和2.23倍(P<0.01)。
結論： Pax-8 siRNA能選擇性下調心肌細胞中Pax-8的表達,并促進細胞凋亡、抑制細胞增殖。Bcl2114基因
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