中藥復方“別敏”治療呼吸道變應性疾病作用機制的探討.pdf

1、呼吸道變應性疾病包括變應性鼻炎和哮喘，兩者在病因學、發(fā)病機制和病理改變等方面極為相似，因此有學者提出“同一氣道，同一疾病”的觀點。呼吸道變應性疾病的發(fā)病率有逐年增加趨勢，嚴重影響人類的健康和生活質量，現(xiàn)代醫(yī)學對其至今沒有根治方法。中醫(yī)藥有著悠久歷史，療效肯定，常具有整體調節(jié)作用，所以從中醫(yī)藥中開發(fā)出有效治療呼吸道變應性疾病的藥物前景廣闊。中藥復方“別敏”在澳大利亞進行了嚴格的隨機、雙盲、對照臨床試驗，結果顯示：“別敏”能明顯改善變應性鼻

2、炎患者鼻癢、噴嚏、流涕、鼻塞等臨床癥狀，且能降低患者血清總IgE水平，但具體的作用機制并不清楚，這在一定程度上限制了它的臨床應用。所以在臨床療效肯定的基礎上，對“別敏”治療呼吸道變應性疾病作用機制的探討意義深遠! 第一部分：“別敏”治療哮喘豚鼠模型作用機制的實驗研究 目的：觀察“別敏”的臨床療效能否在哮喘豚鼠模型上得到證實，并初步探討“別敏”抗呼吸道變應性炎癥的作用機制。 方法：將豚鼠隨機分為5組：正常組，模型組

3、，“別敏”高、中、低劑量組，每組各15只。實驗第1天用10％卵蛋白(OVA)腹腔注射致敏豚鼠，實驗第15天用5％OVA霧化吸入誘發(fā)哮喘發(fā)作，觀察以下各項指標的變化：引喘潛伏期，外周血、支氣管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒細胞(EOS)和白細胞介素-5(IL-5)水平，脾淋巴細胞增殖反應及血清皮質酮水平。 結果：1、模型豚鼠外周血、BALF中嗜酸性粒細胞及血清IL-5水平明顯高于正常豚鼠(P<0.05)。2、“別敏”能夠明顯延長

4、模型豚鼠引喘潛伏期(P<0.05)；減少外周血及BALF中EOS數(shù)量(P<0.05)；抑制脾淋巴細胞的增殖反應，特別是高劑量組(P<0.05)；降低血清IL-5水平，尤其是高、中劑量組(P<0.05)。3、模型豚鼠血清皮質酮水平明顯高于正常豚鼠(P<0.05)，“別敏”各劑量組豚鼠血清皮質酮水平與模型豚鼠比較無明顯差異。 小結：“別敏”能夠延長致敏豚鼠的引喘潛伏期，減輕BALF中細胞總數(shù)和EOS數(shù)量，降低外周血EOS數(shù)目和IL-

5、5水平，同時還能抑制脾淋巴細胞的增殖反應，表明：“別敏”具有降低氣道高反應和減輕氣道炎癥的作用。這一結果為臨床試驗提供了佐證。在“別敏”降低氣道高反應和減輕氣道炎癥的同時，還能明顯抑制脾淋巴細胞增殖反應、降低血清IL-5水平，為我們進一步的研究提供了線索。 第二部分：“別敏”對呼吸道變應性小鼠Th1/Th2免疫平衡及血清皮質酮的影響 目的：觀察“別敏”對呼吸道變應性模型小鼠Th1/Th2免疫平衡及血清皮質酮水平的影響，以

6、初步探討“別敏”在治療呼吸道變應性疾病中對內分泌-免疫系統(tǒng)的調節(jié)作用。 方法：BALB/c小鼠隨機分為正常組、模型組和別敏組，每組各10只。利用OVA腹腔注射和滴鼻攻擊建立呼吸道變應性小鼠模型。從滴鼻攻擊時開始灌胃給藥，連續(xù)10天(即實驗第18天至實驗第27天)。實驗第28天麻醉小鼠后，心臟采血處死，用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)方法檢測血清皮質酮水平；取肺組織福爾馬林緩沖液固定后，石蠟包埋，常規(guī)切片后行HE染色，觀察肺組織炎癥浸

7、潤情況；無菌取脾分離脾淋巴細胞運用流式細胞儀檢測Th1/Th2細胞亞群的變化；分離所得的脾淋巴細胞還進行體外培養(yǎng)，接種于24孔板中分別用ConA、OVA刺激培養(yǎng)72小時后收集上清，采用ELISA方法檢測培養(yǎng)上清中白細胞介素-4(IL-4)、白細胞介素-5(IL-5)、干擾素-γ(INF-γ)水平。 結果：1、模型組小鼠肺組織病理切片與正常組比較有大量嗜酸性細胞的浸潤，細支氣管平滑肌增厚，上皮脫落，管腔痙攣縮窄等現(xiàn)象。經“別敏”治

8、療后，小鼠肺組織嗜酸性粒細胞浸潤明顯減少，個別支氣管平滑肌增厚，肺部炎癥浸潤情況明顯減輕。2、模型組小鼠Th2細胞較正常組明顯升高，Th2/Th1比值與正常組比較亦明顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；模型組小鼠脾淋巴細胞培養(yǎng)上清中INF-γ水平與正常組比較顯著降低(P<0.05)，IL-4、IL-5分泌水平較正常組無明顯變化。經“別敏”治療后，小鼠Th2細胞較模型組顯著降低，Th1細胞顯著升高，Th2/Th1細胞比值明顯下降(

9、P<0.05)，趨于正常水平；同時別敏組脾淋巴細胞培養(yǎng)上清IFN-γ濃度較模型組顯著升高，IL-4、IL-5濃度明顯降低(P<0.05)。3、模型組小鼠血清皮質酮濃度明顯低于正常對照組，經“別敏”治療后，血清皮質酮濃度明顯高于模型組(P<0.05)，趨于正常水平。 小結：本研究結果表明：呼吸道變應性疾病不僅有氣道局部炎癥性反應，還存在全身的內分泌、免疫系統(tǒng)功能紊亂，表現(xiàn)為以Th2免疫反應為主的Th1/Th2細胞免疫失衡，及腎上腺

10、皮質功能減退。而“別敏”不僅能夠明顯減輕氣道局部的炎癥反應，還能夠明顯降低IL-4、IL-5分泌水平，提高IFN-γ分泌水平，糾正Th1/Th2細胞失衡；同時還能改善呼吸道變應性模型動物腎上腺皮質功能，提高血清皮質酮水平。這一結果提示：“別敏”能夠糾正變態(tài)反應狀態(tài)下機體內分泌-免疫功能紊亂，這可能是其治療呼吸道變應性疾病重要的整體調節(jié)機制。 第三部分：內源性皮質激素在“別敏”抗氣道炎癥和調節(jié)Th1/Th2細胞因子中的作用

11、 目的：觀察在阻斷內源性糖皮質激素作用的情況下，“別敏”抗氣道炎癥和調節(jié)Th1/Th2細胞因子分泌水平的作用是否發(fā)生變化，初步探討內源性糖皮質激素在“別敏”抗氣道變應性炎癥和調節(jié)Th1/Th2細胞分泌功能作用的影響。 方法：在進行第二部分實驗時平行增設了別敏加阻斷組。別敏加阻斷組小鼠在OVA腹腔注射和滴鼻攻擊建立呼吸道變應性小鼠模型(同第二部分實驗)基礎上，在實驗第17天(OVA滴鼻攻擊前1天)按20mg/kg劑量腹腔注射RU4

12、86 0.2ml；從實驗第18天始，在滴鼻前2小時按30mg/kg劑量腹腔注射ME 0.2ml，在滴鼻前1.5小時按20mg/kg劑量腹腔注射RU486 0.2ml，連續(xù)10天?！皠e敏”給藥方法和時間，以及采樣處理、統(tǒng)計方法均同第二部分實驗。 結果：1、別敏加阻斷組小鼠肺組織病理切片顯示少量淋巴細胞浸潤，未見或個別細支氣管平滑肌增厚，EOS計數(shù)與別敏組比較無明顯差異。2、別敏組小鼠脾淋巴細胞培養(yǎng)上清IL-4、IL-5水平與模型組

13、比較明顯降低，INF-γ水平較模型組明顯升高(P<0.05)；而別敏加阻斷組小鼠脾淋巴細胞培養(yǎng)上清中IL-4、IL-5水平與別敏組比較沒有明顯差異；但INF-~／水平與別敏組比較則有顯著性降低(P<0.05)。 小結： 1、在阻斷內源性糖皮質激素作用情況下，“別敏”仍然能夠減輕氣道的變應性炎癥反應。2、在阻斷內源性糖皮質激素作用情況下，別敏仍能夠明顯降低模型動物脾淋巴細胞分泌IL-4、IL-5水平，但不能明顯升高模型動物脾淋巴細

14、胞分泌INF-γ水平。提示內源性糖皮質激素水平會影響“別敏”對Th1/Th2細胞的分泌功能。 結論 1、“別敏”能夠明顯延長致敏豚鼠引喘潛伏期、減輕哮喘發(fā)作癥狀，并能明顯減少炎性細胞侵潤，表明：“別敏”具有降低氣道高反應和減輕氣道炎癥的作用，為臨床試驗提供了佐證。 2、呼吸道變應性疾病存在全身的內分泌一免疫系統(tǒng)功能紊亂，表現(xiàn)為以Th2免疫反應為主的Th1/Th2細胞免疫失衡，及腎上腺皮質功能減退?！皠e敏”能夠糾正