不同抗癲癇藥物對體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元存活率及其BDNF和p-CREB表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察不同劑量PB、VAP和LTG對體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元存活影響及細(xì)胞內(nèi)BDNF、p-CREB的表達(dá)變化，探索不同抗癲癇藥物所致腦損傷的機(jī)制。 方法：取培養(yǎng)8天的成熟海馬神經(jīng)元，分為LXG組,PB組，VAP組和正常對照組(0.1％DMSO)。根據(jù)藥物劑量，各組又分為高劑量組，中劑量組和低劑量組，分別為使用LTGl2mg/L、8mg/L，和4mg/L，PB26mg/L、13mg/Lm和6.5mg/L,VAP27mg/L、l8mg

2、/L，和9mg/L。分別在加藥后1天、4天、7天用MTT法檢測細(xì)胞存活數(shù)量，免疫組化檢測神經(jīng)細(xì)胞BDNF和PCREB的表達(dá)變化。 結(jié)果： (1)加藥1 d后，PB高劑量組神經(jīng)元的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)連接稀疏，細(xì)胞立體感差，光暈稍模糊，其余各藥物組變化不明顯。 (2)加藥4d后，高、中劑量PB組細(xì)胞均出現(xiàn)退行性變化，軸突變細(xì)，培養(yǎng)板背景清晰度差，見部分細(xì)胞碎片，同時，加入不同劑量VAP的各組細(xì)胞也出現(xiàn)退行性變化，神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)稀疏，

3、光暈?zāi)：?，?xì)胞折光性差，軸突變細(xì)，尤以VAP高劑量組變化明顯，培養(yǎng)細(xì)胞胞體內(nèi)出現(xiàn)明顯氣泡，背景見細(xì)胞碎片。加入不同劑量LTG的各組細(xì)胞也開始出現(xiàn)退化變性，胞內(nèi)出現(xiàn)少量空泡，光暈?zāi)：?，軸突變細(xì)，且神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)明顯稀疏，以LTG中、高劑量組細(xì)胞變化尤其明顯。 (3)加藥后7天，PB高劑量組神經(jīng)元的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)連接稀疏更明顯，在400倍光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞胞體內(nèi)出現(xiàn)氣泡，軸突連續(xù)性差，胞體表面光滑性差。VAP高劑量組神經(jīng)元在400倍光鏡下可觀

4、察到胞體中出現(xiàn)氣泡，PB低、中劑量組，VAP中、低劑量組和LTG各組細(xì)胞情況同加藥后4天。 (4)加藥后1天，高劑量PB組存活率顯著低于正常對照組(P＜0.01)；而低、中劑量PB處理組，以及不同劑量LTG處理組和不同劑量VAP處理組的細(xì)胞存活率與正常對照組比較無明顯差異(P＞0.05)。 (5)加藥后4天，除PB高劑量組外，PB中劑量組的海馬神經(jīng)元增殖率也顯著低于對照組(P＜0.05)，且兩組海馬神經(jīng)元增殖率也都顯著低

5、于PB低劑量組(P＜0.05)；不同濃度LTG處理組，VAP處理組存活率顯著下降(P＜0.05)，而不同劑量組之間存活率沒有差異(P＞0.05)。 (6)藥物維持作用7天，與對照組比較，各種藥物不同劑量對神經(jīng)元存活率無明顯差異(P＞0.05)。 (7)在不同時間，對同種藥物同劑量組進(jìn)行比較，不同劑量LTG組，中、低劑量PB組，高劑量VAP組細(xì)胞存活率隨時間改變而下降(P＜0.05)。 (8)加藥后1d，高劑量PB

6、組神經(jīng)細(xì)胞的p-CREB和BDNF表達(dá)顯著低于對照組和中、低劑量組(P＜0.05)。 (9)加藥4天，中、高劑量PB組細(xì)胞的BDNF和p-CREB表達(dá)都低于正常對照組(P＜0.01)和低劑量PB組(P＜0.05)；高濃度VAP組細(xì)胞的BDNF的表達(dá)低于對照組，低、中劑量組(P＜0.05)，p-CREB的表達(dá)低于對照組，低、中劑量組(P＜0.01)；與對照組和中劑量組比較，BDNF的表達(dá)顯著降低(P＜0.01)，同時也低于低劑量組

7、(P＜0.05)，與對照組比較，高劑量LXG組細(xì)胞的p-CREB表達(dá)顯著降低(P＜0.05)，同時也低于中、低劑量LTG組(P＜0.05)，。 (10)加藥7天，各藥物各濃度組BDNF和p-CREB的表達(dá)與對照組比較均無差異(P＞0.05)。(11)不同時間，同種藥物同劑量比較，中、高劑量PB組，高劑量VAP組和低、中、高劑量LTG組BDNF和p-CREB的表達(dá)下降。 結(jié)論： (1)本試驗(yàn)所用的三種抗癲癇藥物，除

8、PB外，LTG、VAP均可造成體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元死亡。 (2)AEDs所致的神經(jīng)元損傷與劑量存在相關(guān)性，尤以高劑量PB的損害最明顯，可造成體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元急性死亡，造成神經(jīng)元BDNF和p-CREB的表達(dá)迅速顯著下降。 (3)藥物持續(xù)作用后，不同劑量的丙戊酸、拉莫三嗪均可造成海馬神經(jīng)元死亡，影響神經(jīng)元BDNF和p-CREB表達(dá)的改變，考慮與藥物蓄積造成培養(yǎng)環(huán)境改變有關(guān)。 (4)VAP、LTG的體外試驗(yàn)與臨床觀