羅布麻葉多糖的分離純化、結構分析以及與半乳凝集素的相互作用.pdf

1、羅布麻(Apocynum venetum Linn)是我國的傳統(tǒng)中藥，其葉具有降血壓、降血脂、肝保護和抗抑郁等活性?，F(xiàn)如今，有關羅布麻葉的文獻報道近20篇，主要集中在多酚類及糖苷類，尚缺乏對羅布麻葉多糖的分離純化、結構分析和生物活性的報道。
　　 本文對羅布麻葉多糖進行了系統(tǒng)的分離純化，進一步研究了各級分的單糖組成，理化性質及分子量，并對獲得的均一多糖級分的結構特征進行了詳細的分析。
　　 干燥的羅布麻葉經過熱水煮提、乙

2、醇沉淀和Sevag法脫蛋白得到羅布麻葉水溶性粗多糖ALP(5.8％)，其單糖組成為甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖，摩爾比為0.29:1.0:0.55:3.88:1.12:2.20:1.29。ALP經過DEAE-Cellulose柱層析分級，得到一個中性糖級分ALPN和兩個酸性糖級分ALPA-1和ALPA-2。這三個級分均進行了含量、組成以及分子量的分析。ALPA-I和ALPA-2進一步通過Sepharo

3、se CL-6B分級得到兩個較均一的級分ALPA-1a和ALPA-2a。
　　 通過凝膠滲透色譜和高效液相色譜驗證ALPA-la和ALPA-2a兩者為均一的多糖級分，ALPA-la主要由半乳糖(37.55％)、阿拉伯糖(36.92％)、鼠李糖(9.93％)及半乳糖醛酸(8.2％)組成，其分子量為5.0x104 Da，半乳糖和阿拉伯糖占總糖的50％以上，同時Rha/GalA和Gal/Ara均接近1：l。利用13C核磁共振分析發(fā)現(xiàn)，

4、ALPA-1a是以a-D-GalpA-(1，2)-a-L-Rhap為主鏈，帶有阿拉伯半乳聚糖側鏈的多糖，推測其為I型聚鼠李半乳糖醛酸(RG-I)果膠。而ALPA-2a主要由鼠李糖(7.38％)、半乳糖醛酸(67.29％)、葡萄糖(8.29％)、半乳糖(7.07％)和阿拉伯糖(5.43％)組成，其中半乳糖醛酸的比例占總糖的70％左右，其分子量為1.8xl04Da。應用紅外光譜、高碘酸氧化、Smith降解、部分酸水解和13C核磁共振波譜法(

5、13CNMR)對ALPA-2a進行結構分析。研究發(fā)現(xiàn)，ALPA-2a中的半乳糖醛酸主要以a-D-(1，4)連接構成主鏈，還有少量鼠李糖以(1，2)連接方式連接在側鏈，同時，側鏈的Ara和Gal以arabino-(3，6)-galactan方式連接。根據結果推測：ALPA-2a為富含有聚半乳糖醛酸(HG)結構域的果膠類多糖，并帶有少量的RG-I型結構域。
　　 在血細胞凝集阻抑實驗中，ALPA-lb和ALPA-2a表現(xiàn)出明顯的抑制

6、血細胞凝集的活性，即這兩個HG型果膠級分與半乳凝集素-3(Galectin-3)有很強的結合能力。此外，RG-I型果膠級分ALPA-la與Galectin-3也具有較強的結合能力，而AG型果膠級分ALPN與Galectin-3幾乎沒有結合能力。比較各級分的結構特征，我們推測：從羅布麻葉分離得到的果膠中HG型結構級分與Galectin-3的結合能力強于RG-I型級分，而具AG型結構的果膠級分幾乎不與Galectin-3結合，這可能是由于H