正紅菇菌絲體凝集素的分離純化與性質(zhì)研究.pdf

1、本研究采用響應(yīng)面法對液體深層培養(yǎng)的正紅菇（Russula vinosa）菌絲體產(chǎn)胞內(nèi)凝集素的培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化，確定了產(chǎn)凝集素的最適條件：淀粉3.04％，酵母粉0.3％，KH2PO40.2％，MgSO40.1％，裝液量73 mL，轉(zhuǎn)速250 r/min，初始pH5，發(fā)酵時(shí)間5 d。在此條件下，菌絲體產(chǎn)胞內(nèi)凝集素的總活力可達(dá)72127.3，與初始培養(yǎng)條件下的凝集素總活力25044.2相比提高了1.88倍。
　　 正紅菇菌絲體經(jīng)PB

2、抽提，硫酸銨沉淀，DEAE-Sepharose FF離子交換層析和Sephadex G-100分子篩層析純化得到一種凝集素（Russula vinosa Lectin簡稱RVL）。RVL的比活性比粗提液提高了73.3倍，活力回收率達(dá)54.4％。經(jīng)SephadexG-100測得RVL的相對分子質(zhì)量約為55kD。RVL在SDS-PAGE上顯示單一的蛋白帶，只含一個(gè)亞基。
　　 對RVL理化性質(zhì)和部分生物學(xué)活性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，R

3、VL是一種糖蛋白，其中性糖含量為3.87％；以兔紅細(xì)胞檢測凝集活性，凝集活性在20-60℃溫度范圍內(nèi)保持穩(wěn)定；pH在5-9的范圍內(nèi)，RVL的凝集活性保持相對的穩(wěn)定；RVL，對Mn2+、Zn2+、Ca2+有不同程度的依賴作用；對糖的專一性研究表明，D-甘露糖是RVL的專一性抑制糖，蔗糖、D-半乳糖、N-乙酰-D-氨基葡萄糖在一定程度上對凝集活性有抑制作用；RVL的氨基酸組成分析顯示，RVL中含有15種氨基酸，其中組氨酸的含量最高，不含有精