腎上腺髓質(zhì)素2拮抗血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激改善血管內(nèi)皮功能.pdf

1、目的:研究血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的大鼠高血壓模型中,腎上腺髓質(zhì)素2對(duì)血壓的影響;探討腎上腺髓質(zhì)素2拮抗血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮氧化應(yīng)激,減少活性氧產(chǎn)生、改善內(nèi)皮功能的機(jī)制。
　　方法:(1)6周齡雄性 SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、AngⅡ組和AngⅡ+ADM2組,每組6只。采用皮下埋植微量滲透泵的方法分別給予生理鹽水、AngⅡ(150 ng/kg/min)和AngⅡ(150 ng/kg/min)+ADM2(500 ng/kg/h),普食喂

2、養(yǎng)兩周。頸動(dòng)脈插管法測(cè)量大鼠血壓。取大鼠血漿,按照試劑盒說(shuō)明書(shū)分別測(cè)定丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量,超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)和過(guò)氧化氫酶(CAT)的活性。DHE染色法檢測(cè)大鼠胸主動(dòng)脈、腹主動(dòng)脈和腸系膜上動(dòng)脈產(chǎn)生的活性氧。制備大鼠離體胸主動(dòng)脈、腸系膜上動(dòng)脈、尾動(dòng)脈血管環(huán),觀(guān)察 AngⅡ(10-6 mol/L)誘發(fā)血管環(huán)收縮后加入不同濃度ADM2(10-9-10-7mol/L)對(duì)動(dòng)脈環(huán)的收縮曲線(xiàn)的影響。(2

3、)培養(yǎng)HUVEC和EA.hy926細(xì)胞系,分組給予不同濃度的AngⅡ和ADM2處理。DCFH-DA測(cè)定血管內(nèi)皮細(xì)胞活性氧的釋放。Western blot方法檢測(cè)細(xì)胞蛋白的表達(dá)。用膜漿分離法檢測(cè)NADPH氧化酶亞基p47phox的膜轉(zhuǎn)位,用免疫共沉淀的方法檢測(cè)p47phox的磷酸化水平。光澤精化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)NADPH氧化酶活性, MTT還原顯色法測(cè)定細(xì)胞中NADPH/NADP+比值。設(shè)計(jì)ADM2 shRNA序列,與質(zhì)粒載體連接后,轉(zhuǎn)染HE

4、K293細(xì)胞鑒定。在293FT細(xì)胞中包裝針對(duì)ADM2的逆轉(zhuǎn)錄病毒,純化后感染內(nèi)皮細(xì)胞,使ADM2在細(xì)胞內(nèi)低表達(dá)。
　　結(jié)果:(1)采用微量滲透泵給予大鼠 ADM2可以顯著降低 AngⅡ誘導(dǎo)的高血壓,大鼠血漿中抗氧化酶SOD和CAT活性升高,脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA含量降低,血管組織中活性氧產(chǎn)生減少,血漿中NO含量和NOS活性顯著提高。(2) ADM2呈濃度依賴(lài)性和內(nèi)皮依賴(lài)性舒張AngⅡ預(yù)收縮的大鼠血管環(huán)。(3) ADM2可濃度依賴(lài)性地

5、拮抗AngⅡ引起的血管內(nèi)皮細(xì)胞活性氧產(chǎn)生,降低NADPH氧化酶亞基蛋白的表達(dá)并通過(guò)減少 p47phox的膜轉(zhuǎn)位和磷酸化抑制該酶活性。(4)逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞敲低ADM2的表達(dá)后,NADPH氧化酶亞基p47phox和Nox4表達(dá)增加,eNOS表達(dá)下降;AngⅡ刺激使eNOS表達(dá)進(jìn)一步減少。
　　結(jié)論:ADM2可能通過(guò)下調(diào)NADPH氧化酶表達(dá)、抑制該酶活性和上調(diào)eNOS表達(dá)拮抗 AngⅡ誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮氧化應(yīng)激效應(yīng),從而改善內(nèi)皮功能,起