Leber先天黑矇基因型與臨床表型的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：確定Leber先天黑矇(Lebercongenitalamaurosis，LCA)及早發(fā)嚴(yán)重視網(wǎng)膜色素變性（earlysevereretinitispigmentosa，ESRP）的致病基因和突變；研究LCA/ESRP基因型—臨床表型的相關(guān)性。
　　 方法：收集2003年～2012年在我院門診就診并確診為LCA或ESRP的患者，進行臨床和遺傳學(xué)研究。①臨床研究方法：記錄患者病史及家族史等，對患者進行眼科一般檢查（視力、眼位

2、、眼球運動、瞳孔對光反射、眼前節(jié)檢查及散瞳眼底檢查）、驗光、眼底照相、視網(wǎng)膜電圖（electroretinogram，ERG）及相干光斷層掃描(opticalcoherencetomography，OCT)檢查。分析OCT結(jié)果時，采用Calliper功能手動測量黃斑中心凹的厚度，并讀取校正后的后極部直徑3mm視網(wǎng)膜容積；同時記錄視網(wǎng)膜層次結(jié)構(gòu)、形態(tài)，評價IS/OS層和RPE層的完整性。②遺傳學(xué)研究：采取靜脈血5～8ml，同時收集同期的正

3、常人作為對照。經(jīng)典酚氯仿法提取外周血DNA，應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(polymerasechainreaction，PCR)擴增AIPL1、GUCY2D、RDH12、LRAT、RPE65、CRB1和CRX基因的所有外顯子及外顯子—內(nèi)含子接頭處，直接測序確定致病的基因突變。發(fā)現(xiàn)突變后進行SNP分析，以排除該突變是否為已知正常多態(tài)位點，并查詢文獻(xiàn)報道，確定是否為已報道突變。如果確定為新突變，尚需對至少100個（200條染色體）無血緣關(guān)系的正常人進

4、行該位點的PCR擴增、測序，以排除未知群體多態(tài)性的可能。
　　 結(jié)果：共收集先證者109例，男性57例，女性52例；年齡6個月～39歲，中位年齡10歲。其中LCA81例，ESRP28例，108例為雙眼發(fā)病，1例ESRP為單眼發(fā)病。4例父母為近親結(jié)婚。家中患者多于1人的24例，顯性遺傳比例為1.8％。共有95名患者配合了視力檢查，69名患者接受了驗光檢查,59名患者接受了ERG檢查，89名患者接受了OCT檢查。
　　 共確

5、定了35名患者的致病基因，占32.1%。其中AIPL1基因3人(2.8%)、GUCY2D基因6人(5.5%)、RDH12基因10人(9.2%)、LRAT基因0人、RPE65基因4人(3.7%)、CRB1基因10人(9.2%)、CRX基因2人(1.8%)。各基因型臨床特點如下：AIPL1突變患者起病早，病情進展。眼底表現(xiàn)為黃斑金箔樣反光，可伴有椒鹽或骨細(xì)胞樣色素。OCT表現(xiàn)為中心凹擴大，變薄、層次不清，IS/OS層消失，中心凹厚度平均為4

6、1.8±12.32μm，后極部3mm直徑視網(wǎng)膜容積為1.43±0.13mm3。GUCY2D突變患者起病早，病情穩(wěn)定，多有畏光主訴。眼底表現(xiàn)大致正常，OCT表現(xiàn)為形態(tài)尚可，層次尚清，IS/OS層減弱，中心凹厚度平均為119.00±45.18μm，后極部3mm直徑視網(wǎng)膜容積為1.47mm3。RDH12突變患者多兒童起病，早期視力較好，病情進行性進展，黃斑常表現(xiàn)為花瓣樣缺損，眼底常密集骨細(xì)胞樣色素。OCT可表現(xiàn)為黃斑大凹陷，結(jié)構(gòu)消失，或者中心

7、凹擴大變薄、層次不清，IS/OS層消失。中心凹厚度平均為73.94±30.44μm，后極部3mm直徑視網(wǎng)膜容積為1.44±0.26mm3。RPE65突變患者常兒童起病，早期視力較好，病情進行性進展，黃斑區(qū)外觀正常，眼底色素多樣。OCT表現(xiàn)為形態(tài)尚可，層次尚清，IS/OS層減弱，中心凹厚度平均為124.25±26.17μm，后極部3mm直徑視網(wǎng)膜容積為1.71±0.70mm3。CRB1突變患者起病早，病情穩(wěn)定，常合并高度遠(yuǎn)視。眼底表現(xiàn)為黃

8、斑區(qū)萎縮、色素紊亂，甚至呈缺損樣改變，色素以圓形及緡錢樣為主，OCT表現(xiàn)為中心凹加深擴大、中央變薄、旁中心增厚，層次模糊、IS/OS層消失。中心凹厚度平均為50.64±29.50μm，后極部3mm直徑視網(wǎng)膜容積平均為2.19±0.46mm3。CRX突變患者常見顯性遺傳及新生突變，起病早，病情進展。眼底表現(xiàn)為黃斑區(qū)萎縮、眼底散在椒鹽、不規(guī)則色素。OCT表現(xiàn)為中心凹變淺，神經(jīng)上皮層變薄，層次不清，IS/OS層消失。其中1名患者的中心凹厚度為