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文檔簡介
1、目的:在腦缺血的病理機(jī)制中炎癥反應(yīng)起著重要作用,小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的活化和白細(xì)胞的滲出是中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵步驟。腦缺血后炎癥反應(yīng)有兩個過程:小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的活化和血管周圍、腦實質(zhì)內(nèi)巨噬細(xì)胞的出現(xiàn);周圍炎癥細(xì)胞的游走和滲出。粘附分子介導(dǎo)粘附損傷過程和神經(jīng)細(xì)胞損傷的關(guān)系密切。選擇素是血管粘附分子大家族中的一大類成員,參與介導(dǎo)腦缺血再灌注損傷中的炎癥反應(yīng),導(dǎo)致缺血區(qū)腦組織損傷。其中L-選擇素表達(dá)于多種白細(xì)胞,是白細(xì)胞表面標(biāo)志。本
2、課題研究缺血腦組織的L-選擇素表達(dá)和白細(xì)胞滲出,以說明L-選擇素介導(dǎo)白細(xì)胞滲出在腦缺血再灌注損傷中的作用。 過去已經(jīng)應(yīng)用形態(tài)學(xué),免疫組化,生物化學(xué)的方法來研究動物模型腦缺血病灶的炎癥反應(yīng)。這些方法在評價炎癥細(xì)胞滲出抑制劑的有效性時,通常采用組織切片上細(xì)胞計數(shù)的辦法,非常耗時且準(zhǔn)確性欠佳。而與這些方法相比較,應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)可以定量和定性分析局灶性鼠腦缺血再灌注模型的炎癥細(xì)胞,具有速度快、精度高、準(zhǔn)確性好等優(yōu)點。 材料和方法
3、:采用機(jī)械分離法制備腦單細(xì)胞懸液。在流式細(xì)胞術(shù)中使用如下抗體:FITC-Mouse Anti Rat CD62L,PE-Mouse Anti Rat CD45(白細(xì)胞表面抗原)以及相關(guān)同型對照抗體。將66只SD大鼠分為假手術(shù)組,腦缺血再灌注組(模型組)和人工合成E-選擇素干預(yù)組(干預(yù)組),采用線栓法制備大腦中動脈缺血再灌注模型。缺血2h后,設(shè)再灌注2h、6h、12h、24h、48h組,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測各組大鼠大腦缺血側(cè)L-選擇素表達(dá)、
4、白細(xì)胞滲出和分析人工合成E-選擇素的抑制作用。。 結(jié)果:假手術(shù)組無L-selectin和CD45表達(dá);模型組L-selectin在再灌注2h后已經(jīng)表達(dá),再灌注6h達(dá)高峰,再灌注24h、48h明顯減少;模型組CD45表達(dá)在再灌注12h后表達(dá)逐漸增加;與模型組相比,干預(yù)組L-selectin各時間點均下降(P<0.05),干預(yù)組CD45在再灌注12h、24h、48 h時間點的表達(dá)明顯低于缺血再灌注組(P<0.05)。 結(jié)論:
5、大鼠腦缺血再灌注損傷后L-selectin的明顯上調(diào),說明它介導(dǎo)白細(xì)胞和EC的粘附,參與腦缺血再灌注損傷的病理過程。大鼠腦缺血再灌注的早期白細(xì)胞滲出較少,再灌注12h~24h開始有較高的表達(dá),后逐漸增多。人工合成E-選擇素能夠明顯抑制L-selectin的表達(dá),達(dá)到抑制白細(xì)胞與EC的粘附作用,使白細(xì)胞的滲出明顯減少,對大鼠腦缺血再灌注損傷起到保護(hù)作用。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)來分析鼠腦組織是可行的,能夠快速、可靠地分析局灶性鼠腦缺血再灌注模型的神
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