米諾環(huán)素對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注后Caspase-12表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本研究采用大鼠局灶性腦缺血再灌注模型，觀察米諾環(huán)素對(duì)神經(jīng)元凋亡、Caspase-12表達(dá)的影響。 方法：采用大腦中動(dòng)脈線栓閉塞法(線栓法)制備大鼠局灶性腦缺血再灌注模型，缺血60min后恢復(fù)再灌注24h。45只健康成年雄性Wistar大鼠(230±10)g，隨機(jī)分為假手術(shù)組(n=15)、缺血再灌注組(n=18)、米諾環(huán)素干預(yù)組(n=12)。取假手術(shù)組3只，缺血再灌注組6只，依據(jù)Zealonga神經(jīng)功能評(píng)分及TTC染色結(jié)果判

2、斷造模是否成功；其余采用HE染色觀察腦組織病理學(xué)改變，DNA原位末端缺口標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)神經(jīng)元凋亡，免疫組化法檢測(cè)Caspase-12蛋白表達(dá)，反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法(RT—PCR)半定量檢測(cè)Caspase-12mRNA表達(dá)水平。 結(jié)果：1．假手術(shù)組大鼠未出現(xiàn)任何神經(jīng)缺失癥狀；缺血再灌注組大鼠出現(xiàn)不同程度的神經(jīng)功能缺損。TTC染色示假手術(shù)組腦組織呈紅色；缺血再灌注組梗塞蒼白區(qū)域位于額頂顳葉皮質(zhì)及紋狀體外側(cè)部。造模成功。

3、 2．HE染色：假手術(shù)組神經(jīng)元形態(tài)結(jié)構(gòu)正常；缺血再灌注組缺血半暗帶(部分額葉皮層及紋狀體內(nèi)側(cè)區(qū))及海馬CA1區(qū)腦組織結(jié)構(gòu)變疏松，間質(zhì)水腫有空腔形成，神經(jīng)元數(shù)量減少，體積縮小，排列紊亂疏松，神經(jīng)元核固縮，染色質(zhì)邊集；米諾環(huán)素干預(yù)組缺血半暗帶區(qū)、CA1區(qū)結(jié)構(gòu)完整的神經(jīng)元明顯增多，和凋亡細(xì)胞交錯(cuò)存在。 3．TUNEL檢測(cè)結(jié)果：假手術(shù)組僅有零星凋亡細(xì)胞分布；缺血再灌注組凋亡細(xì)胞顯著增多(P＜0.05)；與缺血再灌注組組比較，米諾環(huán)素

4、干預(yù)組凋亡細(xì)胞明顯減少，但高于假手術(shù)組(P＜0.05)。 4．免疫組化：假手術(shù)組Caspase-12蛋白微量表達(dá)；缺血再灌注組表達(dá)明顯增強(qiáng)(P＜0.05)，其表達(dá)的空間分布與TUNEL結(jié)果一致；與假手術(shù)組比較，米諾環(huán)素干預(yù)組Caspase-12表達(dá)亦有增強(qiáng)，但比缺血再灌注組表達(dá)減弱(P＜0.05)。 5．RT—PCR：假手術(shù)組Caspase-12mRNA呈低水平表達(dá)；缺血再灌注組表達(dá)增加(P＜0.05)；與缺血再灌注組比