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1、核黃素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(Riboflavin transporter 2,RFT2),屬于人核黃素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族,在小腸中高表達(dá),主要功能是轉(zhuǎn)運(yùn)核黃素。以往大量的研究證明:
1)食管癌高發(fā)區(qū)人群普遍缺乏核黃素;
2)核黃素缺乏是促進(jìn)食管癌發(fā)生的重要環(huán)境危險(xiǎn)因素;
3)通過(guò)食鹽添加或給予藥片,補(bǔ)充核黃素等微量營(yíng)養(yǎng)素,與安慰劑組相比,能夠顯著降低食管癌高發(fā)區(qū)人群,但存在著明顯的個(gè)體差異。
這暗示著可能是核黃素
2、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,在食管癌高發(fā)區(qū)部分人群中發(fā)生了某些異常。近年,在食管癌中進(jìn)行的一項(xiàng)全基因組關(guān)聯(lián)分析研究發(fā)現(xiàn),位于RFT2基因上游5622nt的一個(gè)SNP位點(diǎn)rs13042395是食管癌易感位點(diǎn)。目前,有關(guān)rs13042395位點(diǎn)是否能夠調(diào)控RFT2基因表達(dá),RFT2在食管癌中的表達(dá)模式及其功能等,均是未知的重要科學(xué)問(wèn)題。在本論文中,我們對(duì)這些科學(xué)問(wèn)題進(jìn)行研究,實(shí)驗(yàn)結(jié)果概述如下。
首先,對(duì)食管癌組織標(biāo)本基因組DNA的rs1304239
3、5位點(diǎn)進(jìn)行測(cè)序,鑒定不同基因型的分布比例,同時(shí)分析與臨床病理資料及患者生存期的相關(guān)性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與擁有CT基因型的患者相比,rs13042395位點(diǎn)CC基因型患者的生存期明顯縮短,P=0.048。
其次,報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示,rs13042395位點(diǎn),與T型等位基因相比,C型等位基因等位基因可以明顯上調(diào)報(bào)告基因的表達(dá);而報(bào)告基因、siRNA干擾、基因過(guò)表達(dá)以及EMSA等實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致提示,rs13042395位點(diǎn)不同基因型調(diào)
4、控下游基因表達(dá)的能力是由于結(jié)合了不同的轉(zhuǎn)錄因子所致。
再次,免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與正常食管上皮組織細(xì)胞相比,RFT2蛋白在食管癌組織細(xì)胞中的表達(dá)定位發(fā)生了顯著變化,在細(xì)胞膜上的表達(dá)明顯減少,主要出現(xiàn)在胞漿及胞核;而胞核高表達(dá)的食管癌患者的生存率顯著低,P=0.017。
另外,在從食管癌細(xì)胞系克隆RFT2基因時(shí),發(fā)現(xiàn)了一種新的剪切亞型,而免疫印跡實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該亞型編碼了一較小的蛋白肽鏈,但具體定位在食管癌細(xì)胞的胞漿,還是
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