hnRNPD在食管癌中表達及生物學(xué)功能研究.pdf

1、目的：探索不均一核核糖核蛋白D(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein D，hnRNPD)在人食管癌組織中的表達。通過沉默和過表達方式研究其在細胞水平對食管癌細胞株生長的影響及作用機制。改變細胞表達水平聯(lián)合X射線對人食管癌細胞輻射敏感性的影響及可能機制。
　　方法：用免疫組織化學(xué)染色法探索食管癌腫瘤組織及癌旁組織中 hnRNPD的蛋白表達差異；轉(zhuǎn)染siRNA-hnRNPD下調(diào)和pcDNA3.

2、1-hnRNPD過表達hnRNPD基因表達水平，采用MTT法及克隆形成實驗檢測改變hnRNPD基因表達后食管癌細胞生長情況的變化；采用Annexin V-PE雙染色法檢測基因表達改變后細胞凋亡變化；熒光素酶報告基因檢測hnRNPD對SOD2-3’UTR的調(diào)控作用；JC-1熒光染色檢測細胞在X射線照射后線粒體膜電位變化；Western blot法檢測相關(guān)蛋白表達水平變化。
　　結(jié)果：hnRNPD在食管癌組織中高表達；hnRNPD在食

3、管癌腫瘤組織中表達水平與腫瘤分期存在相關(guān)性。hnRNPD可以作用于SOD2-3’UTR參與SOD2表達調(diào)控并影響其蛋白表達；hnRNPD基因表達的改變能明顯影響食管癌細胞的生長和克隆形成能力；下調(diào) hnRNPD基因表達后，與對照組相比食管癌細胞 Eca-109凋亡明顯增加。hnRNPD與SOD2蛋白表達量隨X線照射劑量增加而增加；改變基因表達水平聯(lián)合輻射效應(yīng)影響食管癌細胞生長存活能力；射線照射引起線粒體膜電位降低，而轉(zhuǎn)染組與非轉(zhuǎn)染組未見