蛋白水解誘導(dǎo)因子核心肽mRNA在食管癌組織中的表達(dá).pdf

1、目的：
　　 惡病質(zhì)是一種以短期內(nèi)體重下降，脂肪和肌肉群進(jìn)行性消耗為特征，即出現(xiàn)碳水化合物、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)代謝的變化，同時(shí)伴有厭食、貧血、浮腫、衰竭等表現(xiàn)的綜合征。引發(fā)惡病質(zhì)的具體機(jī)制不是很清楚。大多數(shù)進(jìn)展期惡性腫瘤的普遍表現(xiàn)是癌性惡病質(zhì)的發(fā)生發(fā)展，它是這些疾病死亡的一個(gè)重要的獨(dú)立因素。在惡病質(zhì)病人中，骨骼肌萎縮是由于蛋白代謝增加和蛋白合成的減少，兩種情況可能同時(shí)發(fā)生，從而造成嚴(yán)重的肌肉萎。引發(fā)惡病質(zhì)的具體機(jī)制不是很清楚。在癌性惡

2、病質(zhì)中組織代謝所涉及的因子，包括腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，白細(xì)胞介素-1(IL-1)，白介素-6(IL-6)，干擾素-γ(IFN-γ)，脂解因子鋅 α2-糖蛋白，腫瘤特殊產(chǎn)物。但有研究顯示血清中TNF-α、IL-1、IL-6和IFN-γ都與患有進(jìn)展期和終末期癌癥的病人的體重減輕無(wú)明確聯(lián)系。蛋白水解誘導(dǎo)因子(proteolysis-inducing factor，PIF)，一種與惡病質(zhì)病人的體重減輕有關(guān)的因子。最開(kāi)始從MAC16腫瘤

3、模型中分離，人類PIF的同系物隨后在體重減輕的惡病質(zhì)病人的尿液中檢出。在體內(nèi)和體外，PIF都可以引起骨骼肌的蛋白水解。PIF為糖基化的蛋白，分子量約為24kDa，包括一段4kDa的核心肽和碳水化合物殘基。一些胃腸道的腫瘤和腫瘤細(xì)胞系過(guò)量表達(dá)PIF蛋白。
　　 人類來(lái)源的PIF定義為人類惡病質(zhì)相關(guān)蛋白(HCAP)，在前列腺癌患者檢測(cè)出它的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)證明僅在前列腺癌細(xì)胞系中檢測(cè)出HCAPmRNA的表達(dá)，而在間質(zhì)組織中沒(méi)有表達(dá)。把這些

4、癌細(xì)胞植入小鼠體內(nèi)，小鼠的體重減輕明顯和HCAPmRNA的表達(dá)有關(guān)。PIF核心肽的基因定位于12號(hào)染色體(12q13.1)，并于正常皮膚、乳腺和腦組織以及源于原發(fā)和轉(zhuǎn)移腫瘤的各種癌細(xì)胞中鑒定出它的轉(zhuǎn)錄物。本研究主要通過(guò)半定量RI-PCR的方法，檢測(cè)PIF-CP mRNA在食管鱗狀細(xì)胞癌腫瘤組織、癌旁組織以及正常組織中的表達(dá)情況以及PIF-CP mRNA的表達(dá)與腫
　　 方法
　　 提取60例食管癌患者腫瘤組織和癌旁組織的

5、總RNA，同時(shí)提取11例食管良性疾病患者的正常食管組織的總RNA。通過(guò)測(cè)量RNA純度及濃度，用半定量RT-PCR的方法檢測(cè)PIF核心肽基因mRNA在食管鱗狀細(xì)胞癌腫瘤組織癌旁組織以及食管良性疾病手術(shù)切除的正常食管組織的表達(dá)。根據(jù)Genbank人類來(lái)源的PIF基因序列(AY590150)設(shè)計(jì)特異性引物，取10μlPCR產(chǎn)物經(jīng)1.2％瓊脂糖凝膠電泳，GeneFander染色鑒定，凝膠成像分析系統(tǒng)進(jìn)行拍照、分析。通過(guò)軟件測(cè)量灰度值。以PIF-

6、CP與β-actin之比，作為PIF-CP mRNA的相對(duì)的表達(dá)量。
　　 結(jié)果
　　 用半定量RT-PCR的方法，檢測(cè)食管癌患者腫瘤組織和癌旁組織及食管良性疾病患者手術(shù)切除的正常食道組織的PIF-CP基因的mRNA表達(dá)，發(fā)現(xiàn)腫瘤組織與癌旁組織中表達(dá)水平無(wú)明顯差異(P>0.05)。盡管在正常組織中也檢測(cè)出PIF-CPmRNA的表達(dá)，但是與腫瘤患者的腫瘤組織和癌旁組織相比表達(dá)的水平非常低(P<0.05)。PIF-CP基因m