IL-1、β1，4-GalTⅠ在胚胎著床中的作用及對(duì)其它著床相關(guān)因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的：哺乳動(dòng)物的胚胎著床是一個(gè)極其復(fù)雜的過(guò)程。胚泡的成功植入依賴(lài)于胚胎與子宮之間恰當(dāng)?shù)南嗷プ饔?。胚胎的發(fā)育起始于受精卵，它是一個(gè)單個(gè)的全能細(xì)胞，經(jīng)過(guò)有絲分裂形成多細(xì)胞結(jié)構(gòu)，即胚泡。同時(shí)，卵巢類(lèi)固醇激素的增加啟動(dòng)信號(hào)級(jí)聯(lián)放大過(guò)程，促進(jìn)子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞蛻膜化，使子宮準(zhǔn)備接受胚胎。各種著床相關(guān)因子的表達(dá)隨著床進(jìn)程發(fā)生變化，促進(jìn)胚胎與子宮內(nèi)膜的相互識(shí)別、黏附。 白細(xì)胞介素-1（Interleukin-1，IL-1）由巨噬細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞和

2、滋養(yǎng)層細(xì)胞產(chǎn)生，是介導(dǎo)胚泡著床最主要的細(xì)胞因子之一。IL-1家族包括IL-1α、IL-1β和IL-1受體拮抗劑（IL-1ra），研究表明：IL-1α和IL-1β在子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中廣泛存在；受精卵的成功植入與胚胎環(huán)境中高濃度的IL-1α和IL-1β相關(guān)；IL-1Ⅰ型受體（IL-1RⅠ）基因敲除的小鼠生育能力受到損傷。 β1，4-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶Ⅰ（β1，4-galactosyltransferaseⅠ，β1，4

3、-GalTⅠ）是糖基轉(zhuǎn)移酶中最早被純化的，也是研究最深入的成員之一，主要定位于大多數(shù)真核細(xì)胞的高爾基體，參與糖蛋白和糖脂中寡糖鏈的延伸。β1，4-GaITⅠ還被發(fā)現(xiàn)存在于細(xì)胞表面，是細(xì)胞外糖苷底物的受體。細(xì)胞表面的β1，4-GalTⅠ作為一種黏附分子，參與細(xì)胞黏附、鋪展、精卵識(shí)別、神經(jīng)軸突生長(zhǎng)、組織形成和腫瘤轉(zhuǎn)移，而胚胎著床與腫瘤轉(zhuǎn)移、侵襲過(guò)程非常相似。 本文主要以IL-1和β1，4-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶Ⅰ作為研究對(duì)象，觀察它們?cè)谂咛?/p>

4、著床中的作用，及對(duì)子宮內(nèi)膜其它著床相關(guān)因子表達(dá)的影響，進(jìn)而探討胚胎著床的調(diào)控機(jī)理。 方法：將已構(gòu)建好的β1，4-GalTⅠ基因干擾質(zhì)粒、過(guò)表達(dá)質(zhì)粒、干擾對(duì)照質(zhì)粒和空載體質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染RL95-2細(xì)胞（模擬著床期子宮內(nèi)膜細(xì)胞）后，采用免疫印跡（Dot-blot）、RT-PCR等技術(shù)分析各組轉(zhuǎn)染細(xì)胞中β1，4-GalTⅠ對(duì)IL-1β和MMP-9表達(dá)的影響；將著床相關(guān)因子IL-1β及其受體拮抗劑IL-1ra分別與RL95-2細(xì)胞共培養(yǎng)，

5、檢測(cè)11-1β對(duì)β1，4-GalTⅠ、MMP-9和COX-2表達(dá)的調(diào)控；通過(guò)由RL95-2細(xì)胞（模擬著床期子宮內(nèi)膜）和JAR細(xì)胞（模擬著床期胚胎）組成的體外著床模型，觀察β1，4-GalTⅠ對(duì)胚胎黏附率的影響。 結(jié)果：質(zhì)粒轉(zhuǎn)入RL95-2細(xì)胞60h后，細(xì)胞內(nèi)有明顯的綠色熒光蛋白表達(dá)；RT-PCR結(jié)果顯示：與正常培養(yǎng)組、空載體組和干擾對(duì)照組相比，β1，4-GalTⅠ的基因表達(dá)明顯降低；過(guò)表達(dá)組βl，4-GalTⅠ基因表增高，說(shuō)明質(zhì)

6、粒轉(zhuǎn)染效果良好。同時(shí)觀察到，抑制βl，4-GalTⅠ的基因表達(dá)，MMP-9基因表達(dá)和蛋白合成降低，JAR細(xì)胞的黏附率（36．2%）低于正常培養(yǎng)組（72．1%）、空載體組（70．6%）和干擾對(duì)照組（68．7%）；過(guò)表達(dá)βl，4-GalTⅠ，MMP-9基因表達(dá)和蛋白合成增高，JAR細(xì)胞的黏附率（83．9%）也明顯增高。但是調(diào)控，βl，4-GalTⅠ基因的表達(dá)，對(duì)IL-1β的表達(dá)無(wú)明顯影響。 RL95-2細(xì)胞經(jīng)與IL-1β共培養(yǎng)24