貓備用背根節(jié)內(nèi)NT-3和相關(guān)神經(jīng)肽的表達(dá)及其作用探討.pdf

1、在胚胎早期神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素-3(neurotrophin-3，NT-3)對(duì)神經(jīng)元的存活、突起生長(zhǎng)及靶選擇發(fā)揮著重要的作用，隨著胚胎的發(fā)育其表達(dá)逐漸減少，功能作用也隨之減弱。在成年動(dòng)物神經(jīng)損傷后，NT-3的表達(dá)再次增高，參與到損傷修復(fù)的過(guò)程中。有實(shí)驗(yàn)顯示成年貓部分背根損傷后備用背根節(jié)中NT-3mRNA表達(dá)上調(diào)，同時(shí)保留的備用背根在脊髓內(nèi)發(fā)生了側(cè)支出芽，以代償丟失的初級(jí)傳入纖維，提示增多的NT-3很可能參與了上述的代償、修復(fù)過(guò)程。

2、 為了探明成年貓正常背根節(jié)和部分去背根后備用背根節(jié)內(nèi)源性NT-3對(duì)節(jié)內(nèi)神經(jīng)元的作用和作用模式，NT-3對(duì)備用背根側(cè)支出芽的影響，以及背根節(jié)內(nèi)與NT-3功能可能有相關(guān)關(guān)系的神經(jīng)肽的表達(dá)及作用，本文采用CTB神經(jīng)束路追蹤、分離神經(jīng)元培養(yǎng)、免疫組織化學(xué)、免疫熒光、酶聯(lián)免疫吸附等技術(shù)從三個(gè)方面進(jìn)行研究：NT-3促背根節(jié)神經(jīng)突起生長(zhǎng)作用探討；備用背根節(jié)內(nèi)NT-3表達(dá)的變化及作用模式探討；背根節(jié)神經(jīng)元內(nèi)NT-3與肽類(lèi)物質(zhì)的共存及相關(guān)作用的探討。

3、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 第一部分：CTB追蹤結(jié)果顯示成年貓脊髓L<,5>～L<,2>節(jié)段橫切片中，左右兩側(cè)的背索中均可見(jiàn)到CTB標(biāo)記的有髓神經(jīng)纖維斷面，各節(jié)段手術(shù)側(cè)背索中的標(biāo)記纖維均多于非手術(shù)側(cè)，提示備用背根有明顯的側(cè)支出芽。培養(yǎng)的成年貓備用背根節(jié)組神經(jīng)元存活細(xì)胞數(shù)及神經(jīng)突起的數(shù)量和長(zhǎng)度明顯多于正常背根節(jié)組和備用背根節(jié)加抗NT-3抗體封閉組。提示背根節(jié)內(nèi)源性NT-3有維持節(jié)內(nèi)神經(jīng)元存活、促進(jìn)神經(jīng)突起生長(zhǎng)的作用，備用背根節(jié)內(nèi)可能增多

4、的NT-3使這一作用表現(xiàn)得更為明顯。 第二部分：免疫組化結(jié)果顯示，成年貓背根節(jié)部分神經(jīng)元表達(dá)NT-3或TrkC，在部分背根切斷后備用背根節(jié)中表達(dá)NT-3或TrkC的神經(jīng)元數(shù)目明顯增多，EIISA也檢測(cè)到NT-3含量顯著增加，提示部分背根損傷后，備用背根節(jié)內(nèi)NT-3的表達(dá)增強(qiáng)。結(jié)合第一部分培養(yǎng)結(jié)果可以認(rèn)為備用背根節(jié)中增多的NT-3強(qiáng)化了其維持節(jié)內(nèi)神經(jīng)元存活和促進(jìn)神經(jīng)突起生長(zhǎng)的功能。背根節(jié)連續(xù)切片的免疫組化顯示，成年貓背根節(jié)中部分神

5、經(jīng)元既表達(dá)NT-3又表達(dá)TrkC，而部分神經(jīng)元僅表達(dá)NT-3。提示背根節(jié)內(nèi)的NT-3可能通過(guò)自分泌和旁分泌兩種模式發(fā)揮作用。 第三部分：免疫組化結(jié)果顯示，部分背根損傷后7天備用背根節(jié)中NPY免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)目減少，只足還沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；CGRP免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)目增多。這些小同的改變可能都與備用背根節(jié)內(nèi)NT-3表達(dá)增高有關(guān)。背根節(jié)連續(xù)切片的免疫組化顯示NT-3分別與NPY、CGRP共存于成年貓背根節(jié)部分神經(jīng)元中，進(jìn)一步揭示

6、NT-3可能與這兩種神經(jīng)肽在功能方面有相關(guān)性。部分去背根后NT-3和這兩種神經(jīng)肽表達(dá)的平行變化提示這些神經(jīng)肽可能與損傷過(guò)程或者損傷修復(fù)過(guò)程有關(guān)。 本研究的結(jié)論是： 成年貓背根節(jié)內(nèi)NT-3可能以自分泌和旁分泌方式作用于TrkC受體，從而發(fā)揮維持節(jié)內(nèi)神經(jīng)元存活、促進(jìn)其突起生長(zhǎng)的作用。部分背根損傷后備用背根節(jié)內(nèi)源性NT-3與其受體TrkC平行上調(diào)，強(qiáng)化其神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用，可能是促進(jìn)備用背根中有髓神經(jīng)纖維側(cè)支出芽的重要因素。NPY、