靈芝、NT-3和FGF-2對海馬EGF反應(yīng)性神經(jīng)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元的誘導(dǎo)作用.pdf

1、目的：比較靈芝、神經(jīng)營養(yǎng)素3(NT-3)和堿性成纖維細(xì)胞生長因子(FGF-2)對新生大鼠海馬表皮生長因子反應(yīng)性神經(jīng)干細(xì)胞(EGFr-NSC)分化為神經(jīng)元的誘導(dǎo)作用。 方法：在含EGF的培養(yǎng)體系中分離培養(yǎng)NSC，免疫熒光染色檢測NSC特征性標(biāo)志nestin的表達(dá)，Brdu摻入實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖狀態(tài)。將NSCs接種在24孔培養(yǎng)板中，分成6組，每組4孔：對照組、靈芝組、NT-3組、FGF-2組、FGF-2+NT-3組和FGF-2+NT-

2、3+靈芝組。其中靈芝為1ug/ml，NT-3為40ng/ml，F(xiàn)GF-2為20ng/ml。隔天換液一次，培養(yǎng)10d時(shí)，用免疫細(xì)胞化學(xué)染色和熒光標(biāo)記技術(shù)檢測其神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)的表達(dá)，并計(jì)算陽性染色細(xì)胞的百分率。 結(jié)果：EGF反應(yīng)性NSC生長和增殖速度快，細(xì)胞遷移和分化不明顯，細(xì)胞間結(jié)合疏松，機(jī)械吹打后易成單細(xì)胞懸液，且具有連續(xù)克隆能力。經(jīng)與Brdu共孵育后培養(yǎng)形成的神經(jīng)球，92﹪左右細(xì)胞Brdu表達(dá)陽性。連續(xù)傳代7次