神經(jīng)生長因子（NGF）對神經(jīng)干細(xì)胞的分化以及對神經(jīng)元軸突形成的影響.pdf

1、目的: 本實驗探討了神經(jīng)生長因子(NGF)對體外培養(yǎng)的新生鼠神經(jīng)干細(xì)胞生長和分化的影響，以及神經(jīng)生長因子對神經(jīng)軸突形成和生長的作用。 方法: 1、材料：2-3天的新生SD大鼠，均由中國醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。 2、主要試劑：DMEM/F12(1:1)培養(yǎng)基、B27因子、EGF因子、bFGF因子、NGF因子和Nestin、NSE、GFAP免疫化學(xué)試劑盒。 3、實驗方法和結(jié)果判定：體外分離培養(yǎng)新生S

2、D大鼠神經(jīng)干細(xì)胞。培養(yǎng)過程中通過光學(xué)顯微鏡觀察干細(xì)胞的生長情況。再通過Nestin、NSE和GFAP免疫組化染色對培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。繼續(xù)進(jìn)行分組分化培養(yǎng)(10％FBS組作為對照組，NGF+10％FBS組作為實驗組；)，分化培養(yǎng)6天后對培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行NSE免疫組化染色，并對實驗組和對照組的NSE陽性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行計數(shù)，求得NSE陽性細(xì)胞數(shù)。通過對神經(jīng)元附加同心圓對細(xì)胞軸突的數(shù)量進(jìn)行計數(shù)。 4、統(tǒng)計學(xué)處理：統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS統(tǒng)計軟件，

3、計量資料以均數(shù)+標(biāo)準(zhǔn)差表示，P<0.01有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果: 本實驗結(jié)果顯示：所培養(yǎng)出的細(xì)胞團(tuán)均為Nestin陽性，誘導(dǎo)分化后均可產(chǎn)生NSE和GFAP陽性細(xì)胞。分組分化培養(yǎng)后NGF組中神經(jīng)元所占比例為12.93±2.4，對照組神經(jīng)元所占的比例約為5.83±1.7，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。對兩組神經(jīng)軸突的數(shù)量進(jìn)行分析后，NGF組中單個神經(jīng)元的軸突數(shù)量平均為8.9±0.9，對照組中單個神經(jīng)元軸突數(shù)量平均為3.9±0.2，對兩組

4、結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析后，結(jié)果具有差異性。 討論: 神經(jīng)干細(xì)胞因具有高度自我更新能力、多潛能分化、低免疫原和遷移功能等特性。本次試驗通過對不同培養(yǎng)階段的細(xì)胞進(jìn)行觀察，原代培養(yǎng)第二天開始出現(xiàn)細(xì)胞克隆團(tuán)，此細(xì)胞團(tuán)體積不斷擴(kuò)增而且數(shù)量也在不斷增多。傳至第4代時進(jìn)行單克隆培養(yǎng)，單克隆細(xì)胞團(tuán)經(jīng)過Nestin免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示均成呈陽性，而且經(jīng)過分化培養(yǎng)后均能產(chǎn)生NSE和GFAP陽性細(xì)胞。這些都表明了所培養(yǎng)細(xì)胞是具有高度自我復(fù)制能力和

5、分化能力的神經(jīng)干細(xì)胞。對此神經(jīng)干細(xì)胞分組分化培養(yǎng)，并進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，計算NSE陽性細(xì)胞數(shù)的結(jié)果顯示實驗組NSE陽性細(xì)胞數(shù)明顯高于對照組，這一結(jié)果也證實了NGF可促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元。 本次試驗還觀察了在神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化過程中NGF對軸突生長的作用，結(jié)果顯示加入NGF的實驗組中的軸突數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于對照組．這說明NGF在神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化過程中，能夠促進(jìn)那些未長出軸突的神經(jīng)細(xì)胞向極化狀態(tài)轉(zhuǎn)變并增加生長錐的生成，最終增加分

6、化后神經(jīng)元軸突數(shù)量。 通過將本次試驗與其它關(guān)于NGF促進(jìn)軸突生長和再生的實驗相聯(lián)系，不難推測：神經(jīng)元在初期生長出生長錐和軸突的機(jī)制與后期軸突出芽、分枝和再生的機(jī)制可能基本相同，即使這兩個機(jī)制不相同，也有一點(diǎn)不可否認(rèn)，就是這兩種機(jī)制均能能夠被NGF所啟動。下一步實驗應(yīng)該進(jìn)一步研究NGF在此過程中所采用的是什么樣的信號傳到途徑，究竟引發(fā)了什么樣的具體機(jī)制來促進(jìn)神經(jīng)元初期軸突的形成和生長，這將對神經(jīng)干細(xì)胞應(yīng)用于臨床有重大意義。