干細(xì)胞融合誘導(dǎo)EMT的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：腫瘤轉(zhuǎn)移過程有多種因素參與，上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)可能是促進(jìn)其轉(zhuǎn)移的因素之一，細(xì)胞融合在EMT中的作用值得重視。本研究體外培養(yǎng)正常胃粘膜上皮細(xì)胞系(GES-1)及GES-1與臍帶來源間充質(zhì)干細(xì)胞(CM-MSCs)的融合細(xì)胞，探索細(xì)胞融合參與上皮細(xì)胞EMT的可能。
　　方法：體外培養(yǎng)GES-1、CM-MSCs及融合細(xì)胞，觀察細(xì)胞形態(tài)及生長特性。劃痕實(shí)驗(yàn)、Franswell實(shí)驗(yàn)檢測融合細(xì)胞遷移侵襲能力。噻唑藍(lán)比色分析法(MTT)

2、分析融合細(xì)胞增殖活性。免疫細(xì)胞化學(xué)染色法分析三種細(xì)胞E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表達(dá)情況。RT-PCR技術(shù)檢測三種細(xì)胞EMT相關(guān)基因Slug、Twist的mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。
　　結(jié)果：融合細(xì)胞與GES-1相比，細(xì)胞核增大，胞漿減少。融合細(xì)胞增殖活性較CM-MSCs及GES-1明顯增強(qiáng)；獲得向基質(zhì)膠侵襲的能力，遷移與侵襲能力增強(qiáng)。融合細(xì)胞間質(zhì)性標(biāo)記蛋白N-cadherin、Vimentin的染色強(qiáng)

3、度分別為4.067±1.387和5.067±1.907，GES-1分別為2.333±1.234和2.067±0.961。融合細(xì)胞與GES-1相比N-cadherin、Vimentin的表達(dá)顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。融合細(xì)胞Twist、Slug因子的mRNA轉(zhuǎn)錄水平分別為0.0122±0.0060和0.0065±0.0022，GES-1分別為0.0013±0.0007和0.0010±0.0003。融合細(xì)胞與GES-1相比

4、Twist、Slug因子的mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：間充質(zhì)干細(xì)胞和上皮細(xì)胞融合產(chǎn)生的融合細(xì)胞核增大，胞漿減少，增殖活性較親代CM-MSCs及GES-1明顯增強(qiáng)，遷移與侵襲能力增強(qiáng)。融合細(xì)胞間質(zhì)性標(biāo)記蛋白N-cadherin、Vimentin的表達(dá)，EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Twist、Slug因子的mRNA轉(zhuǎn)錄水平較上皮細(xì)胞上調(diào)，表明問充質(zhì)干細(xì)胞和上皮細(xì)胞融合誘導(dǎo)子代細(xì)胞發(fā)生EMT，導(dǎo)致子代細(xì)