蒲公英代謝物的抗乳腺癌細胞MCF-7活性成分及其作用機理研究.pdf

1、乳腺癌是女性常見的癌癥之一。而蒲公英作為治療乳腺癌、乳腺增生等疾病的常見中藥,關于其抑制乳腺癌生長的有效成分的研究很有限。蒲公英中抑制乳腺癌細胞生長有效成分的發(fā)現(xiàn)對于治療乳腺癌有十分重要的意義。新的有效成分研究方法的開發(fā)和利用,也進一步為未來其他中藥中有效化合物的探索提供了思路。
　　本研究首先利用了分段技術并結合中藥尿液藥理學尋找蒲公英中抑制乳腺癌細胞MCF-7的活性成分。實驗過程中,蒲公英提取物作用于正常大鼠后,取老鼠的尿液進

2、行研究。獲取的尿液用半制備型的HPLC進行分段,將不同時間點獲得的尿液分別分成11段進行下一步的篩選。取分段后的尿液進行MTT實驗,篩選出潛在的活性段。對活性段進行UPLC-MS分析,查證這些活性段中可能存在的潛在活性成分。通過這個平臺發(fā)現(xiàn)了木犀草素,羽扇豆醇,蒲公英甾醇乙酸酯,蒲公英萜醇,咖啡酸等五種潛在活性成分。
　　然后,本研究對得到的五種潛在活性化合物進行分析篩選。五種化合物分別取不同濃度作用于乳腺癌細胞MCF-7,并設置

3、時間梯度。MTT實驗結果表明,五種化合物對MCF-7細胞都有一定程度的抑制性,且表現(xiàn)為時間依賴性和濃度依賴性。此外,細胞周期試驗進一步驗證MTT實驗結果。
　　最后,選擇木犀草素和羽扇豆醇對乳腺癌細胞MCF-7的抑制作用進行進一步研究,即采用基于氣相色譜質譜聯(lián)用(GC-MS)技術的細胞代謝組學方法結合傳統(tǒng)生物學實驗的方法來研究木犀草素和羽扇豆醇作用于MCF-7細胞的作用機理。本研究中對MCF-7細胞前處理的方法進行了優(yōu)化,盡可能得

4、到多的代謝物進而提高分析的準確度。同時,對經(jīng)過前處理的細胞樣品進行衍生化處理后,通過GC-MS分別對未加藥細胞和加藥細胞代謝物進行指紋圖譜分析,進一步應用主成分分析(PCA)和偏最小二乘判別分析(PLS-DA)對代謝組學數(shù)據(jù)進行多維統(tǒng)計分析。
　　木犀草素對乳腺癌細胞MCF-7細胞的抑制作用研究結果顯示,與未加藥細胞相比,加藥細胞中發(fā)現(xiàn)D-Galactose、D-Ribose等10種對分類有顯著貢獻的代謝小分子物質。結合藥物將細胞