猴頭菌等藥用真菌中神經(jīng)活性成分的篩選、分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定.pdf

1、老年性癡呆，是一種原因不明以認(rèn)知功能減退為主要臨床表現(xiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。PC12細(xì)胞是大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤來源的未成熟神經(jīng)元的細(xì)胞系，廣泛用于神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理研究和藥物篩選。在中國(guó)藥用真菌作為藥物用于治療疾病已經(jīng)有2000多年的歷史。藥用真菌中含有多糖、萜類、黃酮等多種生物活性成分，具有免疫調(diào)節(jié)、抗癌、抗菌和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)等眾多藥理作用。目前已發(fā)現(xiàn)靈芝、猴頭菌等多種藥用真菌具有神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)和神經(jīng)損傷保護(hù)作用，但研究主要集中在促PC12細(xì)胞突

2、起生長(zhǎng)方面，而采用活性跟蹤手段對(duì)藥用真菌中神經(jīng)活性物質(zhì)進(jìn)行系統(tǒng)的分離純化和活性研究的工作未見報(bào)道。 本研究建立PC12神經(jīng)突起生長(zhǎng)模型和PC12細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型，對(duì)猴頭菌等4種藥用真菌提取物進(jìn)行了促神經(jīng)突起生長(zhǎng)和氧化應(yīng)激損傷保護(hù)作用研究，并采用活性跟蹤的方法對(duì)猴頭浸膏進(jìn)行了分離純化。 研究發(fā)現(xiàn)，部分靈芝菌株和猴頭脂溶性提取物有一定的促PC12細(xì)胞神經(jīng)突起生長(zhǎng)作用，但是作用并不顯著。在4種藥用真菌中，均發(fā)現(xiàn)了具有一定氧

3、化應(yīng)激損傷保護(hù)作用的菌株和有效部位。GC15的活性最好，但活性不是隨著作用濃度的增加而增加，樣品濃度為50μg/mL，時(shí)活性最好，細(xì)胞存活率為(88.36±1.8)％。DT4在樣品濃度為50μg/mL時(shí)活性最好，細(xì)胞存活率達(dá)到(68.23±0.3)％。HW樣品在50μg/mL時(shí)活性最好，細(xì)胞存活率為(78.08±3.1)％。FC5在樣品濃度為150μg/mL時(shí)活性最好，細(xì)胞存活率為(81.2±3.1)％。 本研究對(duì)猴頭浸膏活性較

4、好的HE和HC部分進(jìn)行了分離純化，得到的大多組分在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)具有一定氧化應(yīng)激保護(hù)作用。在5個(gè)萃取部分中，HE的活性隨著濃度增高而增高，樣品濃度為5μg/mL時(shí)細(xì)胞存活率為(40.35±1.1)％，樣品濃度為50μg/mL，時(shí)細(xì)胞存活率為(63.53±4.1)％，樣品濃度為150μg/mL細(xì)胞存活率為(69.26±3.3)％，對(duì)其進(jìn)行柱層析分離后，得到的HE5-1-3，樣品濃度為5μg/mL時(shí)細(xì)胞存活率為(42.54±3.2)％，樣品

5、濃度為50μg/mL時(shí)細(xì)胞存活率為(50.48±0.5)％，樣品濃度為150μg/mL細(xì)胞存活率為(62.33±1.3)％。對(duì)HC其進(jìn)行柱層析分離后，得到的HC3-7-1，樣品濃度為5μg/mL時(shí)細(xì)胞存活率為(46.37±6.1)％，樣品濃度為50μg/mL時(shí)細(xì)胞存活率為(58.73±4.1)％，樣品濃度為150μg/mL細(xì)胞存活率為(61.44±2.7)％。分離純化得到兩個(gè)化合物活性均有一定氧化應(yīng)激保護(hù)作用，但是活性卻下降。