猴頭菌液體發(fā)酵及多糖的提取純化研究.pdf

1、猴頭菌(Hericium erinaceum)是食用真菌。近年來，猴頭菌以其豐富的營養(yǎng)和獨特的生物活性，日益受到廣泛的關(guān)注。利用農(nóng)產(chǎn)品加工的副產(chǎn)品如米糠或麩皮等液體發(fā)酵生產(chǎn)猴頭菌多糖有一定的經(jīng)濟意義，有利于社會的發(fā)展和人民的身體健康。為實現(xiàn)這個目標，本研究的主要內(nèi)容涉及以米糠為基礎(chǔ)培養(yǎng)基的猴頭菌的液態(tài)發(fā)酵、超聲輔助提取猴頭多糖、復(fù)合酶提取猴頭多糖、猴頭多糖純化及其抗氧化性能。
　　 以米糠為基礎(chǔ)培養(yǎng)基進行猴頭菌液體發(fā)酵，分別進行

2、了碳源、氮源、葡萄糖添加量、蛋白胨添加量、米糠添加量、無機鹽組成以及接種量、裝樣量、起始pH值、培養(yǎng)時間、培養(yǎng)溫度、轉(zhuǎn)速的單因素試驗。在下列條件下：培養(yǎng)基中葡萄糖為20g/L、培養(yǎng)基pH為5.0、KH2PO4為1.5g/L、MgSO4為0.75g/L，接種量為10％、溫度為28C、轉(zhuǎn)速為150r/min，對目標培養(yǎng)基中米糠濃度及蛋白胨添加濃度、250mL三角瓶培養(yǎng)基裝樣量三個因素進行Box-Behnken響應(yīng)面試驗，優(yōu)化發(fā)酵條件：目標培

3、養(yǎng)基裝樣量為150mL，蛋白胨濃度為9.8g/L，米糠添加濃度為23.3g/L（先稱重米糠，再用煮出物配制），得到猴頭菌的菌絲干重為11.28g/L，總多糖量為3.64g/L。
　　 采用超聲輔助提取法提取猴頭菌多糖，考察了超聲功率、超聲提取時間、超聲間歇時間、超聲發(fā)出時間、液料比五個單因素，進而用L9(34)正交試驗優(yōu)化了工藝：液料比40:1，超聲功率1200W，超聲發(fā)出時間3s，超聲間歇時間2s，超聲時間15min，提取率為

4、75.9％。
　　 采用復(fù)合酶法提取猴頭菌多糖，進行了纖維素酶和蝸牛酶的最適添加量、酶解溫度、酶解時間和pH值的單因素試驗，選擇了纖維素酶添加量、蝸牛酶添加量、酶解時間3個因素作L9(34)正交試驗，得到的最優(yōu)工藝參數(shù)為：酶解液pH值為6.5，酶解溫度35℃，纖維素酶添加量為1.5％，蝸牛酶添加量2.5％，酶解時間5h，提取率為98.4％。
　　 研究了猴頭多糖的脫雜和純化工藝：比較分析H2O2法、次氯酸鈣法以及活性炭吸

5、附脫色法的脫色效果，結(jié)果表明活性炭吸附法脫色效果最好；比較分析三氯乙酸法、sevage法、三氯乙酸-正丁醇法，結(jié)果表明Sevage法為脫蛋白較好的方法。
　　 使用DEAE-52纖維素對脫色脫蛋白后的猴頭多糖進行純化，得到HEP1、HEP2、HEP3三個純多糖組分，經(jīng)測定，多糖純度分別為84.31％、78.47％和72.16％；同時進行了理化檢測和紅外光譜分析。
　　 通過進行猴頭多糖清除羥自由基、還原能力、清除DPPH