羊肚菌液體深層發(fā)酵條件及多糖提取工藝的研究.pdf

1、羊肚菌是一種珍貴的食藥兩用真菌，營養(yǎng)豐富，且羊肚菌多糖具有增強(qiáng)肌體免疫力、抗疲勞、抗腫瘤、抗衰老等諸多功效。目前，就有關(guān)羊肚菌液體深層發(fā)酵方面，僅研究了發(fā)酵條件對(duì)菌絲體生物量的影響，而未考慮對(duì)發(fā)酵液中胞外多糖產(chǎn)量的影響，在菌絲體多糖和胞外多糖提取過程中，各關(guān)鍵因素對(duì)多糖提取效率的影響也沒有進(jìn)行研究。 本研究以羊肚菌(Morchella esculenta)為材料，采用液體深層發(fā)酵技術(shù)，研究不同培養(yǎng)基和發(fā)酵條件對(duì)菌絲體生物量和胞外

2、多糖產(chǎn)量的共同影響，并對(duì)羊肚菌的液體深層發(fā)酵工藝進(jìn)行優(yōu)化。研究了在菌絲體多糖和胞外多糖提取過程中，各關(guān)鍵因素對(duì)提取效率的影響，并對(duì)多糖提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，以期為羊肚菌發(fā)酵產(chǎn)品，特別是發(fā)酵多糖的進(jìn)一步研究提供理論基礎(chǔ)和科學(xué)依據(jù)。主要研究結(jié)果有： 1．以發(fā)酵獲取的菌絲體生物量和胞外多糖產(chǎn)量為指標(biāo)，通過一次單因素篩選試驗(yàn)和兩次正交試驗(yàn)，對(duì)碳源、氮源及無機(jī)鹽進(jìn)行篩選，最終確定了羊肚菌液體深層發(fā)酵的最優(yōu)培養(yǎng)基配比為：玉米粉4.0％、葡萄糖1

3、.0％、黃豆粉2.0％、酵母粉0.3％、KH<,2>PO<,4> 0.2％、MgSO<,4> 0.1％、CaSO<,4> 0.1％。 2. 在確定最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，進(jìn)行不同溫度、起始pH、裝液量、接種量、搖床轉(zhuǎn)速的單因素試驗(yàn)，通過液體搖瓶培養(yǎng)，研究了各因素對(duì)菌絲體生物量和胞外多糖的影響。確定了羊肚菌搖瓶培養(yǎng)的最優(yōu)條件為：24℃、起始pH 5.8、搖瓶裝液量10ml/250ml、接種量10.0ml、搖床轉(zhuǎn)速140r/min。

4、 3．羊肚菌發(fā)酵液中菌絲體生物量與胞外多糖產(chǎn)量呈正相關(guān)，與氨基氮含量呈一定負(fù)相關(guān)，與還原糖含量及發(fā)酵液pH有一定的相關(guān)性。發(fā)酵第108h，菌絲體生物量最大，胞外多糖產(chǎn)量接近最大值，還原糖含量和蛋白質(zhì)含量接近最低值，可以確定菌絲體生長、增殖已達(dá)到最佳狀態(tài)，確定108h左右為發(fā)酵的終點(diǎn)時(shí)間。 4．在羊肚菌發(fā)酵菌絲體多糖提取過程中，對(duì)浸提比、浸提時(shí)間、浸提溫度和醇析濃度這四個(gè)因素進(jìn)行正交設(shè)計(jì)，確定了發(fā)酵菌絲體多糖的最佳提取工藝

5、為：浸提溫度為80℃，提取時(shí)間150min，浸提比1:40，醇析濃度為75％，即加3倍水體積的95％乙醇沉淀后，沉淀物經(jīng)無水乙醇反復(fù)洗滌后，真空冷凍干燥，得菌絲體粗多糖。在羊肚菌發(fā)酵胞外多糖提取過程中，對(duì)濃縮倍數(shù)、濃縮溫度、醇析濃度和提取液pH值這四個(gè)因素進(jìn)行正交設(shè)計(jì)，確定了胞外多糖的最佳提取工藝為：首先將離心去除菌絲體的濾液的pH調(diào)至6.0，80℃濃縮至原體積的1/3，冷卻后加入預(yù)冷的95％乙醇使其終濃度為75％，放置4℃冰箱至少24