離體動作電位記錄在藥物延長QT間期安全性評價中的應(yīng)用.pdf

1、QT間期指體表心電圖上QRS波群Q波的起始點到T波恢復(fù)到基線的時間，代表心室去極化和復(fù)極化過程，心室復(fù)極化過程延遲即引起QT間期的延長。QT間期延長的結(jié)果是大大增加心臟發(fā)生室性心動過速的危險，最嚴(yán)重的后果是引發(fā)尖端扭轉(zhuǎn)型室性心動過速（Tdp），Tdp很易轉(zhuǎn)為室顫而發(fā)生猝死。近年來發(fā)現(xiàn)許多藥物由于抑制心肌延遲整流K+電流快激活成分IKr（由human ether-a-go-go-related gene即HERG編碼）而致QT間期延長，此

2、類藥物涉及各個系統(tǒng)治療藥物，除延遲復(fù)極的抗心律失常藥外，常見藥物包括抗組胺藥、抗精神失常藥及抗菌藥。藥物引發(fā)的心電圖QT間期延長，雖然發(fā)生率不高，但潛在危險性大，嚴(yán)重可誘發(fā)Tdp甚至猝死。對這類藥物潛在致命性威脅的認(rèn)識和管理亦引起國內(nèi)外的廣泛重視。人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會（ICH）發(fā)布了“人用藥品延遲心室復(fù)極化（OT間期延長）潛在作用的非臨床評價”指導(dǎo)原則，原則要求對QT間期延長藥物的非臨床安全性評價包括：1）采用離體動物或人體心

3、臟細胞、培養(yǎng)心臟細胞系或克隆人離子通道的異種表達體系測定離子流。2）在離體心臟標(biāo)本進行動作電位參數(shù)測定，或在麻醉動物中進行能體現(xiàn)動作電位周期的特異性電生理參數(shù)檢測。3）測定清醒或麻醉動物的ECG參數(shù)。4）在離體心臟標(biāo)本或動物進行致心律失常作用測定。通過上述體內(nèi)、外4個不同功能水平的研究，全面評估藥物潛在的致心律失常危險性。
　　 目前我國對藥物延長QT間期的認(rèn)識處于起步階段，尚未見到開展相關(guān)的研究工作。作為建立“QT間期延長藥物

4、安全性評價體系”的一部分，本研究利用傳統(tǒng)電生理記錄方法，建立體外動作電位參數(shù)測定的評價方法，并利用此方法評價了兩種中藥成分雷公藤紅素、烏頭堿對動作電位參數(shù)的影響。研究對預(yù)測藥物不良反應(yīng)及新藥研發(fā)過程中合理評估藥物研發(fā)前景具重要意義。
　　 一.評價藥物延長QT間期動作電位參數(shù)的選擇
　　 目的：確定與藥物誘發(fā)尖端扭轉(zhuǎn)型室性心動過速相關(guān)的動作電位參數(shù)指標(biāo)。
　　 方法：用標(biāo)準(zhǔn)玻璃電極技術(shù)記錄豚鼠乳頭肌的動作電位，比

5、較臨床上能引起QT間期延長且能誘發(fā)尖端扭轉(zhuǎn)型室性心動過速的藥物司帕沙星、索他洛爾，以及臨床上引起OT間期延長但不誘發(fā)尖端扭轉(zhuǎn)型室性心動過速的藥物胺碘酮、苯巴比妥鈉對豚鼠右心室乳頭肌動作電位各種參數(shù)（主要是代表晚期復(fù)極參數(shù)APD90-30和APD90/50）的影響，以及在不同頻率刺激下上述藥物對動作電位時程的影響。
　　 結(jié)果：（1）在1 Hz刺激頻率下，加入不同濃度的藥物后，司帕沙星、索他洛爾及胺碘酮可不同程度地延長APD90，

6、而苯巴比妥鈉縮短APD90。（2）司帕沙星和索他洛爾可顯著延長APD90-30，但胺碘酮和苯巴比妥鈉不影響APD90-30；索他洛爾和苯巴比妥鈉顯著延長APD90/50，而司帕沙星和胺碘酮對此無明顯影響。為驗證不同刺激頻率下上述參數(shù)的變化，我們又增加了0.5及2 Hz兩個刺激頻率。結(jié)果顯示，在0.5 Hz刺激頻率下，司帕沙星和索他洛爾可顯著延長APD90-30，但胺碘酮和苯巴比妥鈉不影響APD90-30；苯巴比妥鈉顯著延長APD90/5

7、0，司帕沙星、索他洛爾和胺碘酮對此參數(shù)無顯著影響。在2 Hz刺激頻率下，司帕沙星可顯著延長APD90-30，但索他洛爾、胺碘酮和苯巴比妥鈉不影響APD90-30，司帕沙星、索他洛爾、苯巴比妥鈉顯著延長APD90/50，胺碘酮對此參數(shù)無顯著影響。（3）在不同刺激頻率下，司帕沙星和索他洛爾對APD90的延長具有反向使用依賴性，相反，胺碘酮具有正向頻率使用依賴性。
　　 結(jié)論：在1 Hz頻率刺激下APD90-30、APD90的反向使用

8、依賴性可以作為評價藥物有無致心律失常危險性的指標(biāo)。
　　 二.雷公藤紅素及烏頭堿對離體動作電位的影響
　　 目的：觀察雷公藤紅素、烏頭堿對離體動作電位的影響，對其潛在致心律失常危險進行評價。
　　 方法：用標(biāo)準(zhǔn)玻璃電極技術(shù)記錄豚鼠乳頭肌的動作電位，觀察雷公藤紅素（10-6M至10-1M）、烏頭堿（0.3μmol/L）不同刺激頻率下（0.5 Hz，1 Hz，2 Hz）對動作電位參數(shù)APD90-30的影響以及有無反向

9、頻率使用依賴性。
　　 結(jié)果：雷公藤紅素在10-6M至10-1M濃度范圍內(nèi)，不影響動作電位總時程（APD90），對APD90-30無影響；烏頭堿在0.01μmol/L至1μmol/L濃度范圍內(nèi)，可縮短動作電位總時程（APD90），以藥物濃度對給藥后APD90百分變化作圖，得出烏頭堿的量效曲線，擬合曲線，求得烏頭堿IC50值為0.3μmol/L。烏頭堿縮短動作電位總時程（APD90），但是明顯延長晚期復(fù)極（APD90-30）。