清心安神方含藥血清對(duì)離體心室肌細(xì)胞動(dòng)作電位和內(nèi)向整流鉀通道的影響.pdf

1、　　目的：觀察清心安神方含藥血清對(duì)豚鼠離體心室肌細(xì)胞動(dòng)作電位(AP)及大鼠離體心室肌細(xì)胞內(nèi)向整流鉀電流(Ik1)的影響。
　　方法：(1)膜片鉗技術(shù)中的鈣耐受的心室肌細(xì)胞分離方法：經(jīng)過(guò)Langendorff灌流系統(tǒng)的改進(jìn),酶濃度的合理選擇及配置,對(duì)溫度、速度、時(shí)間、壓力及pH值的嚴(yán)格控制,對(duì)分離心室肌細(xì)胞的進(jìn)行梯濃度復(fù)鈣；(2)清心安神方空白血清及含藥血清的制備：清心安神經(jīng)驗(yàn)方協(xié)定比例,采用傳統(tǒng)方法煎煮,按人與大鼠的體表面積比

2、,以2~4ml/200(g·次),2次/d,連續(xù)3天,實(shí)際灌胃劑量為其等效劑量的5倍進(jìn)行換算后,濃縮到2.25g生藥/毫升,末次給藥后1h,麻醉后腹主動(dòng)脈取血,室溫下靜置1h,3000rp/min離心20min分離血清?？瞻籽褰M以等體積生理鹽水進(jìn)行灌胃。含藥血清和空白血清均用56℃水浴鍋滅活30min,-20℃保存。(3)清心安神方含藥血清對(duì)豚鼠離體心室肌細(xì)胞動(dòng)作電位的影響：使用Langendorff灌流系統(tǒng)離體主動(dòng)脈逆行灌流豚鼠心臟

3、,聯(lián)合使用膠原酶II和蛋白酶E,急性酶解法分離獲得單個(gè)心室肌細(xì)胞。采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)電流鉗模式記錄動(dòng)作電位,觀察含20%濃度的空白血清及含藥血清和含40%的空白血清及含藥血清的細(xì)胞外液灌流對(duì)AP的影響。(4)清心安神方含藥血清對(duì)大鼠心室肌細(xì)胞內(nèi)向整流鉀通道的影響：使用Langendorff灌流系統(tǒng)離體主動(dòng)脈逆行灌流大鼠心臟,聯(lián)合使用膠原酶II和蛋白酶E,急性酶解法分離獲得單個(gè)心室肌細(xì)胞。采用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)電壓鉗模式記錄Ik1,觀察含

4、20%濃度的空白血清及含藥血清和含40%的空白血清及含藥血清的細(xì)胞外液灌流對(duì)Ik1電流的影響
　　結(jié)果：(1)清心安神方含藥血清對(duì)豚鼠心室肌細(xì)胞動(dòng)作電位的影響：20%含藥血清組使動(dòng)作電位復(fù)極至50%(APD50)和至90%(APD90)時(shí)動(dòng)作電位時(shí)程延長(zhǎng)(n=6 P<0.05)；40%含藥血清組使動(dòng)作電位復(fù)極至 50%(APD50)和至 90%(APD90)時(shí)動(dòng)作電位時(shí)程延長(zhǎng)(n=7 P<0.01)；(2)清心安神方含藥血清對(duì)

5、大鼠心室肌細(xì)胞內(nèi)向整流鉀電流的影響：以測(cè)試電壓-100mV 條件下的穩(wěn)態(tài)電流值作為觀察指標(biāo),清心安神方含藥血清對(duì)IKl內(nèi)向電流成分影響為：20%含藥血清組從(-36.17±17.05)pA/pF抑制為(-24.80±13.94)pA/pF(n=6 P<0.05),40%含藥血清組從(-30.68±10.39)pA/pF抑制為(-21.03±3.47)pA/pF(n=7 P<0.05)。
　　結(jié)論：(1)20%及40%清心安神方