細(xì)梗香草病毒病的病原鑒定.pdf

1、從2010年起，龍巖農(nóng)科所率先在國內(nèi)開展細(xì)梗香草品種選育及規(guī)范化（GAP）種植研究，初步建立了細(xì)梗香草GAP示范基地。在種植過程中發(fā)現(xiàn)，細(xì)梗香草在生長期間常受到病蟲危害，其中病毒病危害尤為嚴(yán)重。據(jù)統(tǒng)計(jì)，田間的發(fā)病率在30％-70%，個(gè)別田塊高達(dá)100%。細(xì)梗香草在受病毒病危害后的主要癥狀為：葉片皺縮不平類似瘤狀突起，葉片黃化花葉，葉片變小變窄。受病毒病危害后將極大地降低細(xì)梗香草品質(zhì)及產(chǎn)量，嚴(yán)重制約了細(xì)梗香草GAP基地的建設(shè)發(fā)展。因此，急

2、需開展有關(guān)細(xì)梗香草病毒病的發(fā)生規(guī)律、病害基礎(chǔ)（病害診斷、病原物鑒定等）及綜合防控技術(shù)等相關(guān)研究。本研究將為防控細(xì)梗香草病毒病提供相關(guān)理論依據(jù)，有助于解決細(xì)梗香草種植過程中受病毒病危害的突出問題，保證細(xì)梗香草病蟲害的防治符合綠色中藥材的要求，有利于確保細(xì)梗香草GAP基地順利建設(shè)發(fā)展，保證細(xì)梗香草藥材產(chǎn)量、質(zhì)量穩(wěn)定可控。
　　本研究通過電鏡對(duì)粗提純病毒粒子進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)侵染龍巖細(xì)梗香草的病毒主要有兩種粒體形態(tài)：800-1600

3、nm的線狀病毒和直徑為25-30 nm的球狀病毒。寄主反應(yīng)測定結(jié)果顯示，此病毒不能通過汁液摩擦接種侵染莧色藜、普通煙、心葉煙、蠶豆等10種指示植物，但能夠在本氏煙、灰藜上產(chǎn)生顏色深淺不一的花葉。提取病毒dsRNA，經(jīng)電泳結(jié)果顯示共有3300 bp、3000 bp和2000 bp左右3條明顯的dsRNA條帶，還有1000 bp-2000 bp之間若干條微弱條帶，經(jīng)分子生物學(xué)鑒定3300 bp條帶為黃瓜花葉病毒（Cucumber mosai

4、c virus，CMV） RNA3的一段序列，同時(shí)血清學(xué)方法也檢測到CMV的存在。
　　利用CMV保守序列的RT-PCR擴(kuò)增方法，測定了細(xì)梗香草CMV分離物（CMV-XC）的基因組全序列，CMV-XC RNA1全長3357nt，包含一個(gè)ORF（95-3076），編碼993個(gè)氨基酸的1a蛋白。CMV-XC RNA2全長為3046nt，包含兩個(gè)ORF。其中2a ORF（79-2655）編碼858個(gè)氨基酸的2a蛋白。2b ORF（241

5、4-2749），編碼112個(gè)氨基酸的2b蛋白。CMV-XC RNA3全長2212nt，內(nèi)含兩個(gè)ORF。其中3a ORF（121-960）編碼279個(gè)氨基酸的3a蛋白，CPORF（1256-1912）編碼218個(gè)氨基酸的CP蛋白。
　　利用能檢測出大部分線狀病毒的馬鈴薯Y病毒屬、馬鈴薯X病毒屬、煙草花葉病毒屬和蔥屬X病毒屬的簡并引物對(duì)不同癥狀的樣品進(jìn)行RT-PCR檢測，結(jié)果顯示細(xì)梗香草上均不含有以上屬病毒。生物學(xué)測定結(jié)果經(jīng)檢驗(yàn)均為C