MicroRNA223通過靶向STAT3調(diào)控Toll樣受體觸發(fā)的巨噬細(xì)胞IL-6和IL-1β的分泌.pdf

1、Toll樣受體(TLRs)通過識(shí)別表達(dá)在細(xì)菌、病毒和真菌組成物上的病原體相關(guān)分子模式，啟動(dòng)宿主抗感染的天然免疫反應(yīng)，產(chǎn)生白細(xì)胞介素6(IL-6)，IL-1β和腫瘤壞死因子(TNF-α)等促炎因子。多功能性細(xì)胞因子IL-6的表達(dá)在免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，其表達(dá)的調(diào)控方式和機(jī)制受到廣泛關(guān)注和研究。盡管在IL-6表達(dá)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑以及轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控機(jī)制已有較多報(bào)道，但目前關(guān)于microRNAs調(diào)控IL-6表達(dá)的研究報(bào)道卻知之甚少。microR

2、NAs為近年來發(fā)現(xiàn)的一類小分子非編碼RNA，它在包括免疫應(yīng)答在內(nèi)的許多生物學(xué)過程中均發(fā)揮重要的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控功能，包括TLR信號(hào)活化后的炎癥應(yīng)答。microRNA 223(miR-223)是一種在髓系細(xì)胞中特異高表達(dá)的一種miRNA，目前對(duì)于miR-223的研究多集中在粒細(xì)胞中，其能負(fù)向調(diào)控粒細(xì)胞的增殖分化以及活化。但是目前對(duì)于miR-223在TLR信號(hào)中是否發(fā)揮作用還未有研究。
　　 我們發(fā)現(xiàn)，用TLR3和TLR4的配體LPS，p

3、olyI：C刺激小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7或原代培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞，熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果顯示LPS，polyI：C刺激后巨噬細(xì)胞中miR-223的表達(dá)水平發(fā)生顯著下調(diào)。用miR-223 mimics進(jìn)行功能研究發(fā)現(xiàn)，miR-223的過表達(dá)可明顯抑制LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞IL-6和IL-1β的mRNA和蛋白表達(dá)水平，但不影響TNF-α的分泌水平。對(duì)TLR4活化后的相關(guān)信號(hào)途徑的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，miR-223對(duì)IκBα，ERK或P38的磷酸化沒有

4、影響，而對(duì)STAT3的總蛋白及磷酸化水平有顯著的負(fù)向調(diào)控作用。由于miRNA主要通過調(diào)控其靶基因的表達(dá)進(jìn)而發(fā)揮生物學(xué)功能，進(jìn)一步的熒光素酶報(bào)告基因試驗(yàn)及STAT3 siRNA等實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-223可以直接靶向抑制STAT3的表達(dá)，而STAT3可促進(jìn)TLR4觸發(fā)的巨噬細(xì)胞IL-6和IL-1β的分泌，但不影響TNF-α的水平。更有趣的是，在尋找TLR4活化后誘導(dǎo)miR-223下調(diào)的因素時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)IL-6是一個(gè)可以促進(jìn)miR-223下

5、調(diào)的因子，在TLR4活化的巨噬細(xì)胞中用IL-6的中和抗體可阻斷這種作用。提示，IL-6可以通過下調(diào)miR-223的表達(dá)，從而釋放對(duì)STAT3的抑制，由此形成一個(gè)對(duì)TLR4觸發(fā)的促炎因子應(yīng)答的正反饋調(diào)控環(huán)路，從而促進(jìn)IL-6自身的分泌。因此，本研究結(jié)果顯示，miR-223可通過在轉(zhuǎn)錄后水平抑制STAT3，從而促進(jìn)TLR觸發(fā)的天然免疫細(xì)胞活化后IL-6的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控免疫應(yīng)答。
　　 上述結(jié)果可為揭示IL-6/miR-223/STA