HIV派生的新型miRNA99對巨噬細胞釋放TNF-α、IL-6、IL-1β和吞噬功能的影響.pdf

1、目的:
　　探討HIV派生的新型miRNA99對巨噬細胞釋放TNF-α、IL-6、IL-1β及其吞噬功能的影響。
　　方法:
　　用佛波酯（PMA）刺激人單核細胞白血病細胞（THP-1）分化成貼壁的巨噬細胞，倒差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)并用流式細胞術測定CD11b并鑒定為巨噬細胞。將鑒定好的巨噬細胞進行分組（分為對照組、LipidA組、miRNA-TAR組、miRNA99組），采用轉染試劑將化學合成的miRNAs瞬時轉染至

2、巨噬細胞內或用LipidA作用巨噬細胞，用人TNF-α、IL-6、IL-1βELISA試劑盒測定細胞上清液TNF-α、IL-6、IL-1β的水平。采用共聚焦顯微鏡觀察巨噬細胞吞噬熒光標記的大腸桿菌的情況。將各組已吞噬熒光標記的大腸桿菌的巨噬細胞制成單細胞懸液，用流式細胞術檢測各組細胞的吞噬率。
　　結果:
　　1.未經PMA刺激的THP-1細胞呈單個懸浮狀態(tài)，圓形或類圓形，葡萄串樣聚集；經PMA刺激后細胞貼壁生長，細胞伸出偽

3、足，呈梭形或多邊形，表明THP-1基本分化為巨噬細胞。
　　2.經PMA刺激24小時后細胞表面CD11b陽性率在99％以上，說明THP-1細胞已大部分分化為巨噬細胞，可以用于后期的實驗。
　　3.LipidA組與miR99組Mφ培養(yǎng)上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β的含量均明顯高于對照組（p<0.05），有統(tǒng)計學差異。但miR-TAR組與對照組無明顯差異（p>0.05）。而且miR99組較LipidA組TNF-α、IL

4、-6、IL-1β水平明顯升高，p<0.05，有統(tǒng)計學差異。
　　4.巨噬細胞胞漿內呈現(xiàn)綠色熒光，說明巨噬細胞已吞噬熒光標記的大腸桿菌。
　　5.各組巨噬細胞吞噬細菌的能力不同，經miRNA99刺激的巨噬細胞吞噬細菌的能力較對照組明顯降低。前期研究已證明內毒素能抑制巨噬細胞的吞噬功能。從上圖中得出，miRNA99組較LipidA組吞噬率降低明顯，說明miRNA99對巨噬細胞吞噬功能的損害較內毒素更明顯。
　　結論: