枯草芽孢桿菌的快速鑒定及其脂肽化合物防治植物病害.pdf

1、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)具有生長速度快，代謝產(chǎn)物豐富，可利用開發(fā)價值高以及食用安全等顯著優(yōu)點，廣泛應用于農(nóng)業(yè)生物防治。對枯草芽孢桿菌進行分離、鑒定以獲得更多具有應用價值的菌株具有重要意義。 采用16s rDNA序列分析法對本實驗室采用傳統(tǒng)方法鑒定的枯草芽孢桿菌菌株B3、38、49、85從進行鑒定。結果表明：測定的芽孢桿菌菌株與己報道的枯草芽孢桿菌屬具有高度的同源性，其中B3、38、49、85菌株的16

2、s rDNA與模式菌株168的同源性分別為99.4％、99.5％、93.8％和99.4％。B3的16S rDNA序列已經(jīng)登錄到了GenBank上，登錄號為：EF492885。應用DNAstar軟件對這些序列進行分析，構建了系統(tǒng)發(fā)育樹，B3、38、49、85與枯草芽孢桿菌模式菌株168聚在一起，說明它們的親緣關系較近。 基質協(xié)助激光解吸附/電離-飛行時間質譜(matrix-assisted laser desorption/io

3、nization-time of flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS)技術是近年來發(fā)展起來的新的質譜離子化技術，通過對細菌成分的分析，束鑒定細菌。用MALDI-TOF-MS對本實驗室分離保存的枯草芽孢桿菌菌株B2、B3、43、49、55、72、85、90進行分析，以來自美國菌種保藏中心菌株168、ATCC6633、ATCC13952、ATCC21332，及柏林理工大學Dr．Joahim Vater

4、惠贈的菌株A1/3、b213、C1為標準菌株。分析結果表明，每個菌株一般出現(xiàn)3～4條譜帶，其中m/z為379、493、618、714、843和969是經(jīng)常和比較穩(wěn)定出現(xiàn)的特征性信號譜帶。提示：這些譜帶可能代表枯草芽孢桿菌產(chǎn)生的次生代謝物質。 枯草芽孢桿菌防治植物病害的主要生物活性物質是脂肽化合物。本試驗用本實驗室已經(jīng)分離純化的枯草芽孢桿菌脂肽化合物，包括surfactin、bacillomycinD和fengycin，進行實驗

5、室抑菌試驗和防治黃瓜霜霉病及煙草花葉病毒病試驗。試驗結果表明， 20μg/mL bacillomycinD和5μg/mL fengycin處理的稻瘟病菌分生孢子頂端芽管產(chǎn)生球形膨大；10μg/mL Surfactin處理的孢子球形較小，芽管主要呈根結狀突起。20μg/mL bacillomycinD、5μg/mL fengycin、10μg/mL surfactin對小麥赤霉病菌分生孢子的抑制作用不如對稻瘟病菌分生孢子明顯，沒有出現(xiàn)球形

6、膨大的現(xiàn)象。用surfactin防治煙草花葉病毒(TMV)，以噴施surfactin 1 d后接種防治效果最好，10 mg/L surfactin對TMV的枯斑抑制率就超過了50％，60 mg/L surfactin處理的枯斑抑制率達95.65％。接種15 d，對照植株全部死亡，而噴施surfactin的植株僅接種的葉片部分枯死，植株仍然可以繼續(xù)生長。未經(jīng)分離純化的100 mg/L脂肽化合物對黃瓜霜霉病的防治效果與80 g/667 m<