TAp63及Bcl-2在急性白血病中的表達(dá)及意義.pdf

1、背景和目的:急性白血病是一類造血干、祖細(xì)胞來(lái)源的惡性克隆性血液系統(tǒng)疾病，其顯著特征是細(xì)胞過(guò)度增殖和凋亡受抑，多種癌基因、抑癌基因及其相關(guān)基因功能異常，引起其相應(yīng)蛋白的變化，導(dǎo)致細(xì)胞周期紊亂，細(xì)胞惡性增殖，凋亡受阻，促進(jìn)了白血病的發(fā)生發(fā)展。多種基因調(diào)節(jié)著細(xì)胞凋亡，細(xì)胞凋亡調(diào)控異常是多種腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵因素之一。p63基因是p53家族成員之一，與p53基因高度同源，但結(jié)構(gòu)和功能不同。p63在腫瘤中的作用目前還不十分清楚，F(xiàn)ridaLant

2、ner等的研究發(fā)現(xiàn)：在正常細(xì)胞中，TAp63能夠上調(diào)Bcl—2 mRNA及Bcl—2蛋白質(zhì)的表達(dá)，對(duì)于維持成熟B淋巴細(xì)胞的生存與增殖能力有重要作用。Bcl—2基因是Tsujimto等從伴有t(14；18)的濾泡性淋巴瘤中發(fā)現(xiàn)的一種癌基因，白血病的發(fā)生與Bcl—2和bcl—x1等其它凋亡途徑調(diào)節(jié)基因的過(guò)度表達(dá)與耐藥相關(guān)。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)p63基因的研究局限于實(shí)體瘤，p63基因在急性白血病中的表達(dá)及意義國(guó)內(nèi)外至今未見(jiàn)報(bào)道，關(guān)于TAp63mRNA

3、及Bcl—2 mRNA在急性白血病表達(dá)的意義，值得進(jìn)一步研究。故本文應(yīng)用半定量RT—PCR方法檢測(cè)初治、復(fù)發(fā)及緩解后急性白血病患者與非惡性血液病患者的骨髓單個(gè)核細(xì)胞中TAp63mRNA及Bcl—2 mRNA表達(dá)水平及它們的相關(guān)性，探討其在急性白血病發(fā)生發(fā)展中的意義。
　　 材料與方法:
　　 1．研究對(duì)象:收集81例初治及復(fù)發(fā)急性白血病(AL)，包括50例急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)和31例初治及復(fù)發(fā)急性髓系白血病(AM

4、L)患者，同時(shí)收集27例非惡性血液病患者為對(duì)照。所有急性白血病患者均為鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液內(nèi)科2010年3月至2010年9月住院的初治或復(fù)發(fā)病例。所有急性白血病患者經(jīng)過(guò)血常規(guī)、骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞化學(xué)、免疫表型及細(xì)胞遺傳學(xué)檢查，符合急性白血病的診斷標(biāo)準(zhǔn)。81例AL患者中男48例，女33例，中位年齡42歲(14～70歲)；50例ALL包括32例急性B淋巴細(xì)胞白血病(B—ALL)，18例急性T淋巴細(xì)胞白血病(T—ALL)。31例AML包

5、括6例AML—M3，14例AML—M2，4例AML—M4，7例AML—M5。對(duì)照組為同期血液內(nèi)科非惡性血液病患者27例，其中男10例，女17例，中位年齡38歲(21歲～57歲)。
　　 2．半定量RT—PCR法分離單個(gè)核細(xì)胞，TRIZOL法提取細(xì)胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，PCR擴(kuò)增25個(gè)循環(huán)。電泳后，紫外燈下照相，所有陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行灰度分析并計(jì)算TAp63/β—actin和Bcl—2/β—actin的比值。
　　 3.

6、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS10．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，定量資料用平均值士標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，兩組獨(dú)立樣本的均數(shù)比較用t檢驗(yàn)，多組定量資料組間比較采用單因素方差分析，TAp63與Bcl—2表達(dá)量的相關(guān)性應(yīng)用Pearson直線相關(guān)分析，以α=0．05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。P<0．05認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.TAp63 mRNA在急性白血病組與對(duì)照組的表達(dá)50例ALL患者TAp63 mRNA表達(dá)的有49例，31例A

7、ML患者均表達(dá)TAp63mRNA，27例對(duì)照組不表達(dá)TAp63 mRNA。TAp63 mRNA在急性白血病組表達(dá)顯著高于非惡性血液病組。
　　 2.TAp63 mRNA在ALL與AML表達(dá)的比較對(duì)50例ALL和31例AML患者的相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行比較，結(jié)果顯示ALL平均表達(dá)量(0．92±0．42)顯著高于AML(0．73±0．22)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.TAp63 mRNA在不同組別ALL的表達(dá)50例ALL包括B—

8、ALL32例和T—ALL18例。32例B—ALL有31例表達(dá)TAp63mRNA，18例T—ALL均表達(dá)TAp63 mRNA，B—ALL的平均表達(dá)量(1．11±0．40)顯著高于T—ALL(0．60±0．18)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 4.TAp63 mRNA在B—ALL、T—ALL、AML表達(dá)的統(tǒng)計(jì)分析對(duì)B—ALL、T—ALL和AML這三組獨(dú)立樣本的TAp63 mRNA平均表達(dá)量進(jìn)行比較，應(yīng)用單因素方差分析(F檢驗(yàn))，顯示三組

9、之間表達(dá)量有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差別，三組樣本的總體均數(shù)不全相等，再對(duì)三組樣本均數(shù)進(jìn)行兩兩比較，應(yīng)用LSD法和Bonferroni法檢驗(yàn)，兩種方法檢驗(yàn)結(jié)果均顯示：B—ALL與T—ALL之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別，B—ALL與AML之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別，但T—ALL和AML表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差別。
　　 5.ALL不同階段TAp63 mRNA表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化動(dòng)態(tài)觀察5例初治ALL患者化療后不同階段TAp63 mRNA的表達(dá)變化，其化療前均高表達(dá)TAp63 mR

10、NA，完全緩解后低表達(dá)或不表達(dá)TAp63 mRNA，復(fù)發(fā)后再次高表達(dá)TAp63 mRNA。復(fù)發(fā)時(shí)TAp63 mRNA的表達(dá)量略高于初治時(shí)，但差異無(wú)顯著性意義。初治及復(fù)發(fā)時(shí)TAp63表達(dá)量顯著高于完全緩解時(shí)，初治及復(fù)發(fā)時(shí)與對(duì)照組相比較，表達(dá)量有顯著差異。完全緩解組與對(duì)照組相比差異無(wú)顯著性意義。
　　 6.Bcl—2 mRNA在ALL、AML與對(duì)照組的表達(dá)50例ALL患者中30例表達(dá)Bcl—2 mRNA(陽(yáng)性率60％)，31例AML

11、患者中20例表達(dá)Bcl—2 mRNA(陽(yáng)性率64．5％)，對(duì)照組均不表達(dá)(陽(yáng)性率0)，急性白血病組與對(duì)照組相比較有顯著差異。ALL與AML兩者相比較差異無(wú)顯著性意義。
　　 7.TAp63 mRNA及Bcl—2 mRNA表達(dá)的相關(guān)性50例ALL患者TAp63 mRNA及Bcl—2 mRNA在AL中的表達(dá)水平有顯著相關(guān)性。
　　 結(jié)論:
　　 1．TAp63及Bcl—2在急性白血病中的表達(dá)明顯高于非惡性血液病患者。