玉米醇溶蛋白水解酶菌株篩選及制備抗高血壓肽研究.pdf

1、本論文以玉米醇溶蛋白為原料,采用微生物發(fā)酵產(chǎn)酶來水解玉米醇溶蛋白制備抗高血壓肽,大大提高玉米蛋白粉的附加值和對玉米資源的綜合利用率,同時為新型降血壓制劑或功能性食品的研制提供依據(jù)。
　　 實驗從Aspergillusoryzae(3042、IF-39、3800、J-rapid)、Bacillusnatto、Mucorhiemallis等菌株中分別篩選出產(chǎn)堿性蛋白酶酶活高的菌株為:Bacillusnatto;產(chǎn)中性蛋白酶酶活高的菌

2、株為:AspergillusoryzaeIF-39。并通過實驗確定了Bacillusnatto菌的最佳培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)基為麥麩豆粕比2:3,培養(yǎng)基初始pH9.0,初始水分含量80％,培養(yǎng)溫度37.5℃,培養(yǎng)時間72h,接菌量1.5mL(1.025x107個菌落/mL)；AspergillusoryzaeIF-39菌的最佳培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)基為麥麩豆粕比3:2,培養(yǎng)基初始pH8.0,初始水分含量60％,培養(yǎng)溫度為28℃,培養(yǎng)時間為96h,接

3、菌量3環(huán)(6.9x106個菌落/環(huán))。
　　 以玉米醇溶蛋白為底物進行酶解,確定了Bacillusnatto菌產(chǎn)酶水解玉米醇溶蛋白的最佳酶解條件為:底物濃度10％,加酶量8000U/g,溫度40℃,pH9.5,水解時間180min,在此條件下得到的水解度達到33.8％；AspergillusoryzaeIF-39菌產(chǎn)酶水解玉米醇溶蛋白的最佳酶解條件為:底物濃度10％,加酶量7500U/g,溫度35℃,pH7.0,水解時間120m

4、in,在此條件下得到的水解度達到33.5％。
　　 通過試驗比較,確定以SephadexG-25作為水解玉米醇溶蛋白水解產(chǎn)物分離純化的介質(zhì),并且確定了Bacillusnatto菌產(chǎn)酶水解玉米醇溶蛋白水解產(chǎn)物分離純化條件為:上樣量1.5mL,洗脫速度1.0mL/min,洗脫液為pH9.0硼酸緩沖液。AspergillusoryzaeIF-39菌產(chǎn)酶水解玉米醇溶蛋白水解產(chǎn)物分離純化的條件為:上樣量1.5mL，洗脫速度1.5mL/mi

5、n,洗脫液為pH7.5磷酸緩沖液。
　　 在上述條件下進行分離純化水解物,分別得到了五個分離組分。并且確定Bacillusnatto菌產(chǎn)酶水解玉米醇溶蛋白水解產(chǎn)物分離純化所得的五個組分中,組分3、4、5的ACE抑制活性較高,其中組分3的抑制活性最高,可以達到89.4％。AspergillusoryzaeIF-39菌產(chǎn)酶水解玉米醇溶蛋白水解產(chǎn)物分離純化所得的五個組分中,組分3、4、5的ACE抑制活性較高,其中組分4的抑制活性最高,