流式細(xì)胞術(shù)醛脫氫酶活性檢測(cè)造血干-祖細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究造血干細(xì)胞移植時(shí)，醛脫氫酶(ALDH)活性能否作為造血干/祖細(xì)胞的標(biāo)志。 方法：收集9份外周血干細(xì)胞移植物標(biāo)本，每份標(biāo)本分為室溫組、4℃組、-80℃組儲(chǔ)存，選擇采集當(dāng)天(d0)、第1天(d1)、第3天(d3)、第7天(d7)四個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。 檢測(cè)方法： (1)流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)低側(cè)向角強(qiáng)熒光(SSC<'lo>ALDH<'br>)細(xì)胞數(shù)，熒光顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞。 (2) FCM檢測(cè)CD

2、34<'+>細(xì)胞數(shù)。 (3)半固體瓊脂法培養(yǎng)造血干/祖細(xì)胞粒.巨噬細(xì)胞集落形成單位(CFU-GM)。 結(jié)果： 1.移植物經(jīng)ALDH活性檢測(cè)試劑盒(ALDEFLUOR)處理后通過(guò)FCM可檢測(cè)到SSC<'lo>ALDH<'br>細(xì)胞。在熒光顯微鏡下可觀察到綠色熒光細(xì)胞。 2.采集當(dāng)天，樣本的SSC<'lo>ALDH<'br>細(xì)胞數(shù)為(1.40±0.65)％，CD34<'+>細(xì)胞數(shù)為(2.01±1.20)％，C

3、FU-GM數(shù)為(19.33±11.85)個(gè)/5×10<'6>cells，三種檢測(cè)指標(biāo)的結(jié)果一致。 3.室溫儲(chǔ)存后樣本的SSC<'lo>ALDH<'br>細(xì)胞數(shù)及CFU-GM數(shù)隨儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)而快速下降，儲(chǔ)存后d1、d3、d7與d0相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，兩者的下降曲線一致。CD34<'+>細(xì)胞數(shù)下降較為緩慢，直至d7時(shí)方呈明顯下降。 4.4℃下儲(chǔ)存d1及d3時(shí)，樣本的SSC<'lo>ALDH<'br>數(shù)及

4、CFU-GM數(shù)與d0相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，d7時(shí)呈明顯下降，與d0相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；CD34<'+>細(xì)胞數(shù)下降但幅度較小，d7與d0相比差異仍然無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，CD34<'+>細(xì)胞數(shù)和CFU-GM數(shù)的下降曲線出現(xiàn)分離。 5.-80℃直接凍存后的d1、d3、d7，樣本的SSC<'lo>ALDH<'br>細(xì)胞數(shù)、CD34<'+>細(xì)胞數(shù)和CFU-GM數(shù)和d0相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0